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1、目的:探討硝酸甘油(Nitroglycerin,NTG)對(duì)人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,HBMSCs)的增殖及向成骨細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制。 研究方法:建立HBMSCs體外培養(yǎng)模型,在含10%胎牛血清的α-MEM培養(yǎng)基中加入β-甘油磷酸、維生素C和地塞米松,誘導(dǎo)HBMSCs向成骨細(xì)胞分化。測(cè)定一氧化氮(nitric oxide,NO)代謝產(chǎn)
2、物,考察不同濃度NTG對(duì)HBMSCs的NO生成的影響;合用內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)拮抗劑L-NAME以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)拮抗劑1400W,探討NTG作用于HBMSCs的機(jī)制是否與eNOS或iNOS有關(guān)。給予不同濃度的NTG,考察其對(duì)HBMSCs的增殖及向成骨細(xì)胞分化的影響:檢測(cè)5一溴脫氧
3、尿核苷(BrdU)摻入率反映細(xì)胞的增殖情況;測(cè)定細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶活性(alkaline phosphataseactivity,ALP activity)與鈣沉積量(calcium deposition)的變化,反映不同濃度NTG對(duì)HBMSCs向成骨細(xì)胞分化的影響,探討一氧化氮和ALP及鈣沉積之間的關(guān)系。 結(jié)果:硝酸甘油(0.1μM-10μM)可增加原代HBMSCs的NO生成量,該效應(yīng)不能被eNOS抑制劑L-NAME及iNOS拮
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