腸炎對GABA興奮大鼠結腸肌條收縮活動的影響.pdf

1、Y-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid，GABA)作為一種抑制性神經遞質，廣泛地分布于人和動物的中樞神經系統(tǒng)。GABA受體有GABAA、GABAs和GAB,Ac三種亞型，免疫組織化學和原位雜交方法研究提示大鼠的消化道中這三種類型的受體都表達。外源性GABA可以影響消化道的運動和分泌等功能，這些作用絕大多數(shù)是由腸神經叢(entericnervous system，ENS)上的GABA受體介導的。因此可以推測，GABA

2、也是ENS內一種重要的神經遞質。由于動物種屬差異和作用部位不同等原因，不同研究組報導的有關GABA影響胃腸道活動的結果并不一致。 痢疾是由痢疾桿菌引起的感染性胃腸疾病，可引起急性和重癥腹瀉。腸道炎癥會誘發(fā)腸神經系統(tǒng)的結構和功能發(fā)生可塑性改變，病人出現(xiàn)長期的腸道運動感覺和功能紊亂，甚至表現(xiàn)為炎癥后腸易激綜合癥(Post Infectious Irritable Bowel Syndrome，PI-IBS)，但機制不清。作為一種重要

3、的神經遞質，ENS內GABA調節(jié)消化道的功能是否會受到腸道炎癥的影響未見報導。本研究采用胃內灌注痢疾桿菌的方式制作大鼠痢疾模型，觀察腸道炎癥對ENS內GABA調節(jié)消化道運動作用的影響，并初步探討其機制。 實驗選用健康雄性Wistar大鼠，胃內灌注福氏痢疾桿菌的方式制備痢疾模型。在痢疾后不同時間犧牲大鼠，制備遠端結腸環(huán)形肌肌條，在灌流肌槽中孵育并記錄肌條自發(fā)收縮活動。以平滑肌肌條張力變化為指標，觀察GABA對結腸遠端環(huán)形肌運動的影

4、響，用Western blot技術測定腸炎前后結腸GABA受體蛋白表達量的變化。所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準誤表示，采用單因素方差分析進行統(tǒng)計學處理，以P<0.05為顯著性差異界值。 實驗結果如下： 1. 外源性GABA引起結腸遠端環(huán)形肌的收縮增強，或者誘發(fā)雙向反應，即在短暫的舒張后伴隨一明顯的收縮增強。GABA興奮結腸運動的作用在濃度為100μmol/l-10mmol/l間呈明顯的劑量-反應關系，GABA濃度為10μmol

5、/l時不影響肌條的自發(fā)收縮。 2. GABAA受體激動劑muscimol(100 μmol/l)明顯興奮結腸收縮，結腸張力在加藥后迅速增高并在1分鐘內達到最高點。GABAB受體激動劑baclofen(100 μmol/l)不影響結腸收縮。 3.GABAA受體拮抗劑bicuculline(10μmol/l)和電壓依賴性Na+通道阻斷劑河豚毒素(tetrodotoxin，TTX，10μmol/L)均完全拮抗GABA對雄性大鼠

6、結腸遠端環(huán)形肌運動的興奮作用。 4. 用福氏志賀菌灌胃制備大鼠痢疾模型，結腸組織切片發(fā)現(xiàn)在灌胃后第10天炎癥最強烈，第14天下降，至第21天恢復正常；反應組織炎性細胞浸潤水平的髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性也在第10天達到最高，21天及其以后恢復正常。 5. 腸炎后第10天GABA對結腸遠端環(huán)形肌收縮的興奮作用降低70％，且在第14-45天仍然保持低水平。 6. Western blo

7、t發(fā)現(xiàn)在痢疾后第10天，結腸GABAA Ra1蛋白表達量明顯下降，第14天及其以后均恢復正常。結腸中未檢測到GABABR1蛋白表達。 7. 氨甲酰膽堿(carbachol)對結腸遠端環(huán)形肌收縮的興奮作用在腸炎后第32及45天與正常大鼠相比沒有明顯改變。 實驗結果表明： 1. 外源性GABA通過ENS內GABAA受體興奮大鼠遠端結腸的環(huán)形肌收縮。 2. 腸炎后GABA.興奮結腸遠端環(huán)形肌收縮的作用受到長時間