肼苯噠嗪對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231雌激素受體α去甲基化的影響.pdf

1、目的： 探討肼苯噠嗪對雌激素受體（ER）α陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231ERα基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島DNA甲基化的影響。 方法： ERα陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231。體外細(xì)胞培養(yǎng)，按藥物濃度分為4組：分別用0、5、10、20μmol/L的肼苯噠嗪干預(yù)ERα陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞96h；按藥物作用時(shí)間分為4組：分別于0、72、96、120h10μmol/L肼苯噠嗪干預(yù)ERα陰性人

2、乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞。倒置光學(xué)顯微鏡下觀察肼苯噠嗪對細(xì)胞生長的影響。各組提取MDA-MB-231細(xì)胞總RNA，用RT-PCR及圖像分析檢測肼苯噠嗪對MDA-MB-231細(xì)胞ERαmRNA表達(dá)的影響；提取MDA-MB-231細(xì)胞基因組DNA，純化、修飾后用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（MSP）檢測肼苯噠嗪對MDA-MB-231細(xì)胞ERα基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化的影響。 結(jié)果： 1.RT-PCR檢測結(jié)果顯示，肼

3、苯噠嗪上調(diào)MDA-MB-231細(xì)胞ERαmRNA表達(dá)。與對照組比較，96h，5、10、20μmol/L肼苯噠嗪組ERα/β-actin光密度積分值比值均明顯升高（p<0.05或p<0.01）；72、96、120h10μmol/L肼苯噠嗪組ERα/β-actin光密度積分值比值均明顯升高（p<0.05或p<0.01）。2.肼苯噠嗪逆轉(zhuǎn)MDA-MB-231細(xì)胞ERα基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀態(tài)。未經(jīng)肼苯噠嗪干預(yù)的ERα陰性人乳腺癌細(xì)胞MD

4、A-MB-231ERα基因呈甲基化狀態(tài)；5μmol/L的肼苯噠嗪干預(yù)MDA-MB-231細(xì)胞120h后，ERα基因呈部分去甲基化狀態(tài)；而經(jīng)10μmol/L肼苯噠嗪干預(yù)細(xì)胞120h后，ERα基因呈完全去甲基化狀態(tài)。 結(jié)論： 1.ERα陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231ERα基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島DNA甲基化可能是導(dǎo)致ERα基因表達(dá)沉默的主要原因。2.肼苯噠嗪可以逆轉(zhuǎn)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231ERα基因啟動(dòng)子區(qū)CpG