豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18基因重組犬腺病毒2型活載體疫苗的基礎研究.pdf

1、囊蟲病(CysticercosisCellulosae)是由豬帶絳蟲(Taeniasolium)的幼蟲寄生于人或豬體內(nèi)而引起的一種重要人畜共患寄生蟲病。人不僅是中間宿主，而且是唯一的終末宿主。腺病毒載體是基因工程疫苗研究中重要的轉(zhuǎn)基因病毒載體，研究和開發(fā)基于腺病毒的重組豬囊尾蚴疫苗，將對控制或根除豬囊尾蚴病具有實踐意義。 以質(zhì)粒pVAX1為載體構建了豬囊蟲病基因免疫用的真核表達質(zhì)粒。首先根據(jù)kozak原理設計了1對表達引物，用P

2、CR方法從構建好的重組質(zhì)粒pGEM-TSOL18中擴增出豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18基因片段，將其定向克隆到質(zhì)粒pVAX1中得到真核表達質(zhì)粒pV-TSOL18。再根據(jù)PCR點突變原理設計4條突變引物，對目的基因進行改造，之后亞克隆入pVAX1載體中獲得含改造后的目的基因的重組表達質(zhì)粒pV-TSOL18m。經(jīng)脂質(zhì)體介導法轉(zhuǎn)染BHK-21細胞36h后用RT-PCR方法檢測到了目的基因的轉(zhuǎn)錄。這為豬囊蟲病基因疫苗動物免疫實驗研究奠定了良好基礎。

3、構建了能表達豬帶絳蟲六鉤蚴TSOL18蛋白的重組犬2型腺病毒CAV2-TSOL18m。首先用SspⅠ對重組質(zhì)粒pVAXE3的E3區(qū)中859bp長度的片段進行缺失，得到含有CAV-2E3區(qū)的穿梭質(zhì)粒pVAX△E3。將所構建的真核表達質(zhì)粒pV-TSOL18m用NdeⅠ+SphⅠ雙酶切，然后將含有TSOL18m基因的完整表達盒(pCMV-TSOL18m-PolyA)進一步定向克隆到pVAX△E3中，構建出p△E3-TSOL18m。通過NruⅠ