小鼠脂肪干細胞分離培養(yǎng)及生物學特性研究.pdf

1、脂肪干細胞(adipose-derived stem cells，ASCs)是脂肪組織中存在的一種成體干細胞，具有便于取材，可向三個胚層方向分化等優(yōu)點。本實驗主要研究ASCs的體外分離培養(yǎng)條件優(yōu)化；ASCs向脂肪細胞、成骨細胞、精子細胞的誘導分化；Reversine對ASCs生物學特性的影響。
　　通過MTT、免疫組化及RT-PCR證明，分離培養(yǎng)的ASCs在35代內保持良好的生物學特性，P5、P15、P25細胞倍增時間分別為34.

2、6 h、37.8 h、38.3 h；持續(xù)表達細胞表面抗原CD29、CD44，不表達造血干細胞特異表面抗原CD45；表達特異性基因CD29、CD34、CD90、Sca-1、c-Myc，不表達Sox-2和Oct-4。說明本實驗采用的ASCs的分離培養(yǎng)方法能夠保持ASCs的未分化狀態(tài)。
　　ASCs在成脂誘導劑誘導下分化為脂肪細胞，誘導第六天油紅O染色計算P5
　　ASCs誘導率為78.3％±9.2％，P15 ASCs誘導率為73

3、.9％±8.7％，P25 ASCs誘導翠為67.0％±1.52％，不同代數間誘導率無顯著性差異；在成骨誘導劑誘導下分化為成骨細胞，第11天進行茜素紅染色，鈣結節(jié)被染成深紅色，放大100倍視野下計數被染色的鈣結節(jié)數量，P5 ASCs為15±2.4個，P15 ASCs為13±3.6個，不同代數之間無顯著性差異；P5 ASCs與睪丸組織共培養(yǎng)，10天后RT-PCR結果顯不表達精子細胞特異基因Prm1、Acr。
　　Reversine終濃

4、度大于5μmol/L時對ASCs有明顯的細胞毒性，濃度為1μmol/L時，對ASCs的增殖率無明顯影響，但可以顯著增加ASCs向脂肪細胞，成骨細胞誘導分化的效率。
　　本實驗建立了ASCs分離培養(yǎng)體系，ASCs可以在此體系內長期培養(yǎng)并保持良好的生物學特性；證明了ASCs具有在適當誘導條件下向脂肪細胞、成骨細胞以及精子細胞分化的潛能；同時證明了reversine可以提高ASCs向脂肪細胞、成骨細胞分化的轉分化率，是一種有效的提高AS