IFN-γ延長HBV持續(xù)時間及機制研究.pdf

1、目的：
　　本研究發(fā)現(xiàn),在高壓水注射HBV復制小鼠模型中,IFN-γ能夠延長HBV持續(xù)時間,但其具體的作用機制尚不明確。因此,本研究從病毒學及免疫學角度來探討IFN-γ延長HBV持續(xù)時間的機制。
　　方法：
　　1.采用高壓水注射的方法將pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-null或pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ質粒轉染到BALB/c小鼠肝細胞內,不同時間點采集小鼠血清和肝脾標本,ELISA方法

2、檢測小鼠血清HBV抗原和抗體,免疫組化檢測肝內HBcAg表達水平,Real-TimePCR檢測HBV復制水平及肝內免疫相關分子的mRNA水平,ELISPOT檢測HBV特異性免疫應答,FACS檢測肝脾內淋巴細胞PD-1和FoxP3的表達,H&E染色觀察肝臟炎性浸潤,IFCC法測血清ALT水平。觀察IFN-γ對HBV的作用并探討IFN-γ是否通過調節(jié)HBV特異性免疫應答及免疫負調控來延長HBV持續(xù)時間。
　　2.將質粒pcDNA3.1

3、(+)/HBs采用肌肉注射聯(lián)合電擊免疫BALB/c小鼠,免疫后2周,高壓水注射pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ質粒,不同時間點采集小鼠血清,ELISA法檢測HBV抗原和抗體水平,觀察IFN-γ對HBV的作用。
　　3.高壓水注射方法將HBeAg/core-nullpAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ或pcDNA3.1(+)/HBs和pCMV2/IFN-γ分別轉染BALB/c小鼠,不同時間點采集小鼠血清,EL

4、ISA檢測血清HBV抗原和抗體水平,觀察IFN-γ對HBsAg持續(xù)時間的影響。
　　結果：
　　1.HBV平均持續(xù)時間為:pAAV/HBV1.2組為28天、pCMV2/IFN-null處理組為22.8天、pCMV2/IFN-γ處理組為44.6天。結果表明,IFN-γ顯著延長HBV在BALB/c小鼠體內持續(xù)時間(P=0.000)。
　　2.IFN-γ具有抗HBV作用,早期抑制HBV復制及表達,晚期促進HBV持續(xù)。

5、　　3.IFN-γ抑制HBsAb和HBcAb產生,抑制HBV體液免疫應答。pAAV/HBV1.2注射后第10天,IFN-γ抑制HBcAg特異性T細胞免疫應答;第20天,3組間沒有統(tǒng)計學差異;第30天,IFN-γ促進HBcAg特異性T細胞免疫應答持續(xù)。此外,在第10、20、30天,未檢測到HBsAg特異性T細胞免疫應答。
　　4.IFN-γ在第注射后10、20、30天均未誘導肝脾淋巴細胞PD-1及FoxP3的表達,但誘導肝內PD-L

6、1、NOS2、IDO、SOCS等分子高表達。
　　5.在pAAV/HBV1.2小鼠模型中,注射低劑量pAAV/HBV1.2(2.5μg),IFN-γ延長HBV持續(xù)時間(P=0.009);注射高劑量質粒(50μg),IFN-γ延長HBV持續(xù)時間(P=0.015)。
　　6.pcDNA3.1(+)/HBs基因免疫小鼠成功后,再注射pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ,IFN-γ促進HBsAb產生,促進HBV清除。

7、>　　7.在HBeAg/core-nullpAAV/HBV1.2小鼠模型中,IFN-γ則促進HBsAg的清除(P=0.036)。在pcDNA3.1(+)/HBs小鼠模型中,IFN-γ對HBsAg清除無影響。
　　結論：
　　1.在BALB/c小鼠模型中IFN-γ早期抑制HBV復制和表達,同時抑制HBV體液免疫應答,并且延長HBV持續(xù)時間。
　　2.HBcAg引發(fā)的特異性免疫應答與病毒清除無直接關系,IFN-γ也未通過誘

8、導免疫負調控來延長病毒的持續(xù)。
　　3.IFN-γ延長HBV持續(xù)時間與抑制HBcAg免疫應答及HBsAb產生有關。
　　本研究的創(chuàng)新點：
　　1.在HBV復制小鼠模型中發(fā)現(xiàn)IFN-γ延長HBV持續(xù)時間。
　　2.闡明IFN-γ延長HBV持續(xù)時間與抑制HBcAg免疫應答有關。
　　本研究的意義：
　　IFN-γ是一個多功能細胞因子,其作用效果和機制與病毒和宿主的多種因素有關,本研究以高壓水注射HBV復制