IFN-β及IRF-7在急性HBV感染小鼠模型中的表達(dá)分析.pdf

1、目的：
　　乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus, HBV）感染的清除機(jī)制目前還不十分清楚?，F(xiàn)已知，病毒感染早期干擾素（Interferon, IFN）的產(chǎn)生是機(jī)體清除病毒的重要環(huán)節(jié)，而干擾素調(diào)節(jié)因子-7（Interferon regulatory factor-7，IRF-7）是IFN誘生的關(guān)鍵因子之一。因此本文擬通過構(gòu)建急性HBV感染小鼠模型，觀察IFN-β及IRF-7的mRNA和蛋白表達(dá)水平在肝組織中的變化，分析

2、其表達(dá)變化與HBV感染的關(guān)系，以期探討其在HBV感染清除機(jī)制中的作用。
　　方法：
　　1.用高壓水動(dòng)力法經(jīng)小鼠尾靜脈注射HBV基因組1.3倍體真核表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA3.1-HBV1.3)構(gòu)建急性HBV感染小鼠模型，以注射空載體pcDNA3.1做對照。
　　2.用電化學(xué)發(fā)光法檢測小鼠血清中HBsAg及HBeAg水平。
　　3.酶免疫組化法檢測小鼠肝臟組織中HBsAg及HBcAg的表達(dá)。
　　4.逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)

3、定量PCR（RT-qPCR）法檢測正常未注射組（NC組）、模型組（pHBV組）及空載體組（pcDNA組）不同時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟中IFN-β、IRF-7等基因的mRNA相對表達(dá)量。
　　5. ELISA檢測各組小鼠肝臟中IFN-β蛋白含量。
　　6. Western Blot檢測各組小鼠肝臟中IRF-7的蛋白表達(dá)水平。
　　7. SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件作多組均數(shù)的方差分析及變量間的相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　

4、1.在HBV質(zhì)粒注射后，小鼠血清中HBsAg水平在第6h為陰性，然后上升，至第24h為陽性（113.89±31.06 COI）（>1 COI為陽性），在第48h達(dá)到峰值（303.40±74.105 COI），隨后逐漸降低；血清HBeAg水平在第24h為陽性（31.06±6.87 COI），并達(dá)峰值，然后逐漸降低。NC組及pcDNA組小鼠血清中HBsAg及HBeAg均為陰性。
　　2. pHBV組小鼠在質(zhì)粒注射后第6h即可檢測到肝臟

5、內(nèi)HBsAg及HBcAg的表達(dá)，在12h時(shí)表達(dá)HBsAg或HBcAg的肝細(xì)胞陽性率達(dá)峰值(分別為20％或18%)，至第5d逐漸消失。NC組及pcDNA組小鼠肝組織內(nèi)HBsAg及HBcAg均為陰性。
　　3. pHBV組小鼠肝臟IFN-βmRNA表達(dá)在第6h升高（為NC組3.4倍），第12h達(dá)最高（為NC組66.5倍），隨后下降，在6h、12h或24h時(shí)與NC或pcDNA組的差異均有顯著性（P<0.05）。同時(shí)，pHBV組小鼠肝臟I

6、FN-β蛋白表達(dá)在12h升高（為NC組8.7倍），與pcDNA組與NC組相比差異有顯著性（P<0.05）。pcDNA組與NC組IFN-βmRNA或蛋白表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均無顯著變化（P>0.05）。
　　4. pHBV組小鼠肝臟IRF-7的mRNA及蛋白表達(dá)水平在第6h、12h、24h均顯著高于pcDNA組及NC組（P<0.05）。且pHBV組IRF-7 mRNA或蛋白的表達(dá)在12h達(dá)到最高（為NC組5.3倍或4.4倍），隨后逐漸下降

7、，至第48h與對照組相比已無顯著性差異（P>0.05）。pcDNA組與NC組相比各時(shí)間點(diǎn)均無顯著變化（P>0.05）。
　　5. pHBV組小鼠肝臟中IFN-βmRNA表達(dá)與HBsAg或HBcAg表達(dá)肝細(xì)胞的陽性率相關(guān)（p=0.01或p=0.02）；IRF-7 mRNA表達(dá)與HBsAg或HBcAg表達(dá)肝細(xì)胞的陽性率相關(guān)（p＜0.001）；IFN-βmRNA表達(dá)與IRF-7 mRNA表達(dá)相關(guān)（p=0.004）。
　　結(jié)論：