IL-6-STAT3信號通路介導(dǎo)胃癌間質(zhì)干細胞與中性粒細胞相互作用促進胃癌進展.pdf

1、目的:探討胃癌間質(zhì)干細胞(GC-MSCs)對中性粒細胞的調(diào)節(jié)作用、機制及生物學(xué)意義，為揭示MSCs通過重塑胃癌微環(huán)境促進胃癌作用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法:
　　(1)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細胞，MTT實驗和流式細胞術(shù)檢測中性粒細胞存活和凋亡情況，Western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白表達情況;實時熒光定量PCR檢測中性粒細胞IL-8、OSM、CCL2和TNF-α基因表達情況;采用GC-MSCs條件

2、培養(yǎng)基處理的中性粒細胞作用于胃癌細胞和血管內(nèi)皮細胞，檢測胃癌細胞遷移能力和內(nèi)皮細胞管形成能力變化。
　　(2)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細胞，Western blot檢測中性粒細胞STAT3和ERK等信號通路活化情況。采用小分子抑制劑阻斷中性粒細胞內(nèi)STAT3或ERK信號通路活化，檢測對中性粒細胞凋亡、活化和功能的影響。
　　(3)采用Luminex液相芯片技術(shù)篩選GC-MSCs條件培養(yǎng)基中調(diào)節(jié)中性粒細胞活化和功

3、能的關(guān)鍵因子，并用實時熒光定量PCR和ELISA進行驗證。采用特異性抗體阻斷劑阻斷關(guān)鍵因子作用，檢測其對GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化中性粒細胞的影響。
　　(4)采用GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化的中性粒細胞上清作用于正常MSCs，Western blot和免疫熒光染色檢測MSCs中CAFs標志物α-SMA和vimentin表達變化。收集經(jīng)活化中性粒細胞誘導(dǎo)的MSCs上清，采用細胞遷移實驗評價活化中性粒細胞誘導(dǎo)MSCs向CAFs分化

4、對胃癌細胞遷移能力的影響。
　　結(jié)果:
　　(1)GC-MSCs條件培養(yǎng)基促進中性粒細胞存活，并抑制其自發(fā)性凋亡。GC-MSCs條件培養(yǎng)基處理中性粒細胞，上調(diào)其IL8、CCL2和TNF-α等炎癥因子表達。GC-MSCs條件培養(yǎng)基活化的中性粒細胞顯著促進胃癌細胞遷移和內(nèi)皮細胞管狀結(jié)構(gòu)的形成。
　　(2)GC-MSCs條件培養(yǎng)基主要通過激活中性粒細胞STAT3-ERK1/2信號通路而活化中性粒細胞。阻斷STAT3-ERK1

5、/2信號通路顯著抑制GC-MSCs條件培養(yǎng)基對中性粒細胞凋亡的保護作用，抑制其對中性粒細胞IL8、CCL2和TNF-α表達的誘導(dǎo)作用;減弱其對胃癌細胞遷移和內(nèi)皮細胞管形成的促進作用。
　　(3)Luminex分析揭示GC-MSCs分泌高水平的IL6。拮抗IL6/IL6R作用明顯抑制GC-MSCs對中性粒細胞的活化作用，并抑制其對胃癌細胞遷移和內(nèi)皮細胞管形成的促進作用。
　　(4)GC-MSCs活化的中性粒細胞上清誘導(dǎo)正常MS