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文檔簡介
1、目的:
研究甘松揮發(fā)油對大鼠心室肌細胞膜L型鈣離子通道的影響。通過甘松揮發(fā)油對鈣離子通道電流(ICa-L)的量.效曲線、電流-電壓(I-V)曲線、激活曲線和失活曲線的影響,探討甘松揮發(fā)油在離子通道水平抗心律失常機制以及其電生理機制。
方法:
1.用急性酶解分離法分離大鼠心室肌細胞,以肝素抗凝,水合氯醛麻醉大鼠后,迅速游離并取出大鼠心臟,懸掛于Langendoff灌流系統(tǒng)離體灌流。先采用無鈣臺氏液
2、灌流離體心臟約5分鐘,再以50微摩爾/升(μmol/L)含蛋白酶E(ProNase E)和膠原酶Ⅰ(CollagenNaseⅠ)的低鈣酶液灌流心臟,待心臟質(zhì)地變軟彈性降低,則停止酶液消化(大約25-35分鐘),再用200μmol/L低鈣臺氏液灌流心臟,沖洗灌流系統(tǒng)及心臟中殘留酶液,然后剪下心室肌組織塊并置于盛有KB液的燒杯中充分剪碎、輕輕吹打、200目尼龍網(wǎng)過濾后置于KB液中室溫下靜置約1-2小時,然后放入4℃冰箱保存。
3、2.采用標準的全細胞膜片鉗技術(shù)(電壓鉗),選取桿狀邊緣完整、無收縮、橫紋清晰和大小適中的細胞在室溫下(20-25℃)進行膜片鉗電流記錄,以電阻為1.0-3.0兆歐姆(MΩ)的玻璃微電極封接大鼠心室肌細胞,形成吉歐高阻封接水平后以適當程度的負壓破膜,補償串聯(lián)電阻和細胞膜電容(Cm),形成全細胞記錄模式,分別測定ICa-L的量-效曲線、電流-電壓(I-V)曲線、激活曲線和失活曲線,觀察不同濃度的甘松揮發(fā)油對大鼠心室肌細胞膜ICa-L的影響。
4、
結(jié)果:
1.濃度為3μg/g,5μg/g,10μg/g,20μg/g,50μg/g甘松揮發(fā)油可濃度依賴性地抑制L型鈣電流。3μg/g,5μg/g,10μg/g,20μg/g,50μg/g對大鼠心室肌細胞L型鈣電流的抑制率分別為(11.18±1.48)%,(24.83±4.82)%,(45.72±3.54)%,(76.87±7.03)%,(100±0)%(每個濃度n=5,P<0.05)。
2.甘
5、松揮發(fā)油對ICa-L的電流密度.電壓關(guān)系曲線(current density-voltagecurve,I-V曲線)的影響:在濃度為10μg/g時,給藥后電流密度從(10.17±1.49)pA/pF減小到(5.67±0.78)pA/pF(n=5,P<0.01),可使心肌細胞ICa-L電流-電壓曲線上移,但激活電位、峰電位及反轉(zhuǎn)電位無改變。
3.甘松揮發(fā)油對ICa-L激活動力學(xué)影響:使激活曲線向正電位方向變化,V1/2從(-
6、5.47±0.50)mV右移至(-2.77±0.49)mV(n=5,P<0.05),斜率因子從4.68±0.39減小至4.50±0.40(n=5,P>0.05)。
4.甘松揮發(fā)油對ICa-L失活動力學(xué)影響:使失活曲線向負電位方向變化,V1/2從(-20.82±0.48)mV左移至(-29.44±1.03)mV(n=5,P<0.05),斜率因子從6.16±0.43增大至11.05±0.86(n=5,P<0.05)。
7、 結(jié)論:
1.甘松揮發(fā)油可呈濃度依賴性抑制大鼠心室肌細胞膜ICa-L電流,隨著濃度增加阻斷作用增強。
2.甘松揮發(fā)油可使ICa-L的電流密度-電壓關(guān)系曲線(I-V曲線)上移,但不改變曲線形狀、激活電位、峰電位及反轉(zhuǎn)電位。
3.甘松揮發(fā)油使ICa-L激活曲線(activation curve)右移,減慢激活。
4.甘松揮發(fā)油對ICa-L失活曲線(inactivation curv
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