當(dāng)歸揮發(fā)油對血管緊張素Ⅱ所致心肌細(xì)胞肥大CaN通路及T通道的影響.pdf

1、目的:
　　觀察當(dāng)歸揮發(fā)油(Angelicanaphtha, AN)對血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)誘導(dǎo)的肥大心肌細(xì)胞CaN通路及T型鈣離子通道的影響,探討當(dāng)歸揮發(fā)油抑制AngⅡ誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　選擇 H9c2心肌細(xì)胞株,將細(xì)胞濃度調(diào)整到1×106cells/mL,37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。用10-4 mg·L-1血管緊張素Ⅱ作用于心肌細(xì)胞24h成功建立

2、心肌細(xì)胞肥大模型。應(yīng)用超臨界萃取裝置提取當(dāng)歸揮發(fā)油。實(shí)驗(yàn)分為5組:空白對照組;模型組;低劑量(5mg·L-1)組、中劑量(10mg·L-1)組、高劑量(20mg·L-1)組。MTT法檢測心肌細(xì)胞活力的改變;激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位和細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,用試劑盒檢測的活性及表達(dá)變化、用western blot檢測CaN蛋白、T型鈣離子通道相關(guān)基因蛋白Cav3.1(CACNA1G)、Cav3.2(CACNA1H)以及凋亡蛋白caspa

3、se-3、caspase-12的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.MTT法檢測心肌細(xì)胞存活率:血管緊張素Ⅱ造模后心肌細(xì)胞存活率明顯增加,與對照組比較,差異有顯著性(P<0.05)。與血管緊張素Ⅱ組相比,當(dāng)歸揮發(fā)油干預(yù)組心肌細(xì)胞的細(xì)胞存活率均有所下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.激光共聚焦檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度:與空白組相比,模型組Ca2+平均熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,

4、當(dāng)歸揮發(fā)油干預(yù)組Ca2+平均熒光強(qiáng)度明顯減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3.激光共聚焦顯微鏡檢測線粒體膜電位,與空白組相比,模型組AngⅡ(濃度10-4mg·L-1)細(xì)胞體積增大,平均熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,當(dāng)歸揮發(fā)油干預(yù)組細(xì)胞體積縮小,線粒體數(shù)目減少,熒光強(qiáng)度明顯減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,與空白組相比,模型組G2期細(xì)胞增

5、多,差異具有顯著性(P<0.05);與模型組相比,當(dāng)歸揮發(fā)油干預(yù)組的G2期細(xì)胞有所減少,差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5.Western Blot檢測CaN蛋白、Cav3.1(CACNA1G)、Cav3.2(CACNA1H)蛋白的表達(dá)情況:AngⅡ組與空白組比較,CaN、Cav3.1、Cav3.2表達(dá)增高,caspase-3和caspase-12凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),與模型組比較,當(dāng)歸揮