當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對血管緊張素Ⅱ致肥大心肌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:通過觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對血管緊張素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)致肥大心肌細(xì)胞凋亡的影響,探討當(dāng)歸補(bǔ)血湯對慢性心力衰竭的作用。
　　方法:測定經(jīng)AngⅡ誘導(dǎo)后心肌細(xì)胞總蛋白含量以驗(yàn)證細(xì)胞肥大。實(shí)驗(yàn)分為空白對照組、AngⅡ(10-7 mol/L)組、AngⅡ+纈沙坦(10-6 mol/L)組、AngⅡ+含藥血清(8.4g/kg)組。采用MTT法分別觀察于0h、12h、24h、48h、72h、96h六個時點(diǎn)各處理

2、措施對心肌細(xì)胞活性的影響,確定AngⅡ最佳作用時點(diǎn);在此時點(diǎn)篩選當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清的最佳濃度;應(yīng)用Hoechst33342染色檢測心肌細(xì)胞凋亡率;單細(xì)胞電泳技術(shù)檢測各組心肌細(xì)胞DNA損傷情況;透射電鏡觀察各組心肌細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化;Western Blotting測定各組心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白p53、Bax、Bcl-2表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.蛋白含量測定:與空白對照組相比,AngⅡ組的心肌細(xì)胞總蛋白含量明顯升高,

3、差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.不同時點(diǎn)心肌細(xì)胞活性:在0h時點(diǎn),各組之間細(xì)胞活性相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在12h、24h時點(diǎn),各組細(xì)胞活性均升高,AngⅡ組明顯高與空白對照組、AngⅡ+纈沙坦組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在48h時各組心肌細(xì)胞活性開始下降,且72h時AngⅡ組明顯低于空白對照組、AngⅡ+纈沙坦組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);在以上6個時點(diǎn),空白對照組與AngⅡ+纈沙坦組相

4、比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清最佳濃度:在48h時點(diǎn), AngⅡ+40％含藥血清組和AngⅡ+20%含藥血清組細(xì)胞活性低于空白對照組和 AngⅡ組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);AngⅡ+10%含藥血清組細(xì)胞活性明顯低于AngⅡ組(P<0.05),與空白對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);AngⅡ+5%含藥血清組細(xì)胞活性明顯高于空白對照組(P<0.05),與AngⅡ組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>

5、0.05)。
　　4.心肌細(xì)胞凋亡率:AngⅡ組心肌細(xì)胞凋亡率明顯高升高,與空白對照組相比有顯著性差異(P<0.05);AngⅡ+纈沙坦組、AngⅡ+10%含藥血清組心肌細(xì)胞凋亡率與AngⅡ組相比明顯降低,有顯著性差異(P<0.05)。
　　5.單細(xì)胞電泳檢測結(jié)果:AngⅡ組心肌細(xì)胞的頭部DNA百分含量減少,尾部DNA百分含量、尾長、尾距增加,與空白對照組比較有顯著差異(P<0.05);AngⅡ+含藥血清組、AngⅡ+纈沙坦

6、組彗星細(xì)胞頭部DNA百分含量增加,尾部DNA百分含量、尾長、尾距均減少,與AngⅡ組相比差異顯著(P<0.05)。
　　6.透射電鏡觀察結(jié)果:空白對照組心肌細(xì)胞線粒體外膜完整,峭清楚,排列整齊,線粒體基質(zhì)致密,結(jié)構(gòu)正常。而AngⅡ組線粒體排列紊亂,部分嵴變短甚至消失,出現(xiàn)空泡變化。AngⅡ+纈沙坦和AngⅡ+含藥血清預(yù)處理組心肌細(xì)胞線粒體除有輕微腫脹,除基質(zhì)密度變淺外,線粒體膜完整清晰與空白對照組無明顯區(qū)別。
　　7. We

7、stern Blotting檢測結(jié)果:與空白對照組相比AngⅡ組p53、Bax蛋白表達(dá)明顯增加(P<0.05),Bcl-2蛋白表達(dá)明顯減弱(P<0.05),Bcl-2/Bax的比值明顯降低(P<0.05)。而AngⅡ+含藥血清組心肌細(xì)胞p53、Bax蛋白表達(dá)顯著減弱,Bcl-2蛋白表達(dá)顯著增加, Bcl-2/Bax的比值顯著升高,與AngⅡ組相比有顯著差異(P<0.05)。
　　結(jié)論:當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對 AngⅡ致肥大心肌細(xì)胞凋