熱休克蛋白70對缺血誘導(dǎo)嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞膜鈣通道影響的研究.pdf

1、目的：探討慢病毒介導(dǎo)的熱休克蛋白70(HSP70)對缺血/缺氧嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(PC12)膜鈣離子通道的影響及機制。
　　方法：構(gòu)建表達(dá)外源性HSP70的重組慢病毒，感染對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞，用嘌呤霉素篩選穩(wěn)定表達(dá)HSP70的PC12細(xì)胞作為實驗組，即重組慢病毒感染組[感染含HSP70及綠色熒光蛋白(GFP)基因的慢病毒]。同時設(shè)置慢病毒對照組[感染含GFP基因但不含HSP70基因的慢病毒]和未感染組(正常對照組)。以缺血/缺氧

2、8h、復(fù)氧12h刺激PC12細(xì)胞模擬體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞遭受缺血/再灌注時的病理過程，采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(Western Blot)檢測L型鈣離子通道cav1.2、cav1.3亞基，受體門控通道基因NR1、NR2，以及Na+/Ca2+交換體(NCX)的mRNA和蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①經(jīng)缺血缺氧再復(fù)氧處理后，重組慢病毒感染組細(xì)胞cav1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表達(dá)均明顯低于

3、慢病毒對照組和未感染組[cav1.2 mRNA(A值)：3.13±0.46比5.12±0.52、5.13±0.66，NR1 mRNA(A值)：1.61±0.44比3.23±0.82、3.31±0.78，NR2 mRNA(A值)：2.09±0.41比3.91±0.64、3.88±0.62，cav1.2蛋白(灰度值)：2.82±0.39比3.98±0.23、3.96±0.24，NR1蛋白(灰度值)：1.84±0.35比2.79±0.21、2

4、.86±0.23，NR2蛋白(灰度值)：0.87±0.24比1.57±0.31、1.33±0.44，均P＜0.01]；而慢病毒對照組與未感染組之間細(xì)胞cav1.2、NR1、NR2的mRNA及蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P＞0.01)。②未感染組、慢病毒對照組和重組慢病毒感染組之間細(xì)胞 cav1.3、NCX的mRNA和蛋白表達(dá)差異均無統(tǒng)計學(xué)意義[cav1.3 mRNA(A值)：4.82±0.32、4.72±0.36、4.82±0.29，

5、NCX mRNA(A值)：3.49±0.78、3.47±0.71、3.56±0.65，cav1.3蛋白(灰度值)：2.63±0.40、2.64±0.39、2.68±0.39，NCX蛋白(灰度值)：3.27±0.48、3.34±0.48、3.31±0.42，均P>0.01]。
　　結(jié)論：外源性HSP70對PC12細(xì)胞膜L型鈣離子通道亞基cav1.2及受體門控通道基因的表達(dá)有顯著影響，可能對缺血/缺氧引起的PC12細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用