HBV通過調(diào)節(jié)miR-499a抑制靶基因CFLAR表達(dá).pdf

1、 目 錄 英漢縮略語名詞對照 英漢縮略語名詞對照 ...................................................................................................... 1 中文摘要 中文摘要 ...............................................................................

2、........................................... 2 英文摘要 英文摘要 .......................................................................................................................... 4 正文： 正文：HBV 通過調(diào)節(jié) 通過調(diào)節(jié) miR-499a 抑制靶基因 抑制靶

3、基因 CFLAR 表達(dá) 表達(dá) ...................................... 6 前 言 ...................................................................................................................... 6 第一部分 第一部分 HBV 上調(diào)肝癌細(xì)胞系中 上調(diào)肝癌細(xì)胞系中 miR-4

4、99a 的表達(dá) 的表達(dá)................................................ 9 1 材料與方法 材料與方法 .......................................................................................................... 9 2 結(jié) 果 .............................

5、..................................................................................... 13 3 討 論 .................................................................................................................. 14 第二部分 第二

6、部分 CFLAR 是 miR-499a 的一個靶基因 的一個靶基因......................................................... 15 1 材料與方法 材料與方法 ........................................................................................................ 15 2 結(jié)

7、果 .................................................................................................................. 27 3 討 論 ..............................................................................................

8、.................... 30 參考文獻(xiàn) 參考文獻(xiàn) ................................................................................................................ 31 第三部分 第三部分 HBV 調(diào)節(jié) 調(diào)節(jié) CFLAR 的表達(dá) 的表達(dá).....................................

9、.................................... 32 1 材料和方法 材料和方法 ........................................................................................................ 32 2 結(jié) 果 ....................................................

10、.............................................................. 32 3 討 論 .................................................................................................................. 33 參考文獻(xiàn) 參考文獻(xiàn) ....................

11、............................................................................................ 33 全文總結(jié) 全文總結(jié) ..................................................................................................................

12、...... 34 參考文獻(xiàn) 參考文獻(xiàn) ........................................................................................................................ 35 文獻(xiàn)綜述： 文獻(xiàn)綜述：miRNAs 在肝癌中的角色 在肝癌中的角色 ..........................................

13、.............................. 36 致謝 致謝 ................................................................................................................................ 45 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 ................

14、............................................................ 46 重慶醫(yī)科大學(xué) 重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生 研究生學(xué)位論文 學(xué)位論文 2 HBV 通過調(diào)節(jié) 通過調(diào)節(jié) miR-499a 抑制靶基因 抑制靶基因 CFLAR 表達(dá) 表達(dá) 摘 要 目的 目的 探討 HBV、miR-499a 及靶基因在肝癌細(xì)胞中的關(guān)系。 方法 方法 1.通過實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PC

15、R)檢測 miR-499a 在HepG2 與 HepG2.2.15 細(xì)胞中、 表達(dá) HBV 的腺病毒瞬時感染 HepG2 細(xì)胞 （ Ad-HBV-HepG2 ） 與 其 對 照 組 感 染 GFP 的 HepG2 細(xì) 胞（Ad-GFP-HepG2）中的表達(dá)。 2.構(gòu)建 miR-499a 的過表達(dá)質(zhì)粒(pTARGET-miR-499a)并且運(yùn)用Real-time PCR 的方法驗(yàn)證過表達(dá)效果，通過 miRNA 靶基因預(yù)測軟件如 Targe

16、tScan 和 miRDB，篩選到 miR-499a 靶基因 CFLAR，構(gòu)建靶基因 CFLAR 的 3′UTR（3′端 Untranslated Regions）野生型和突變型熒光素酶報告質(zhì)粒， 運(yùn)用熒光素酶報告系統(tǒng)檢測靶基因 CFLAR 與 miR-499a的相互作用。 3.通過 Real-time PCR 在 mRNA 水平和 Western-blot 在蛋白質(zhì)水平驗(yàn)證 CFLAR 是否為 miR-499a 的靶基因。購買 miR