核因子-κBp65反義寡核苷酸對(duì)肝星狀細(xì)胞增殖、NF-κB活性、ICAM-1及TGF-β-,1-的影響.pdf

1、目的:通過(guò)轉(zhuǎn)染NF-kBp65反義寡核苷酸(ASODN)進(jìn)入大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC-T6)，了解HSC的增殖和NF-kB活性，以及其產(chǎn)生細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)的改變，探討NF-kBp65 ASODN治療肝纖維化的可能機(jī)制，為利用NF-kBp65 ASODN治療肝纖維化提供理論基礎(chǔ)。 方法:取第3-6代生長(zhǎng)良好的HSC細(xì)胞，人工合成NF-kBp65 ASODN并行全程硫代磷酸化修飾。

2、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染NF-kBp65 ASODN進(jìn)HSC，臺(tái)盼藍(lán)染色排斥法檢測(cè)NF-kBp65 ASODN對(duì)HSC的毒性實(shí)驗(yàn)和MTT法測(cè)定脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染NF-kBp65 ASODN對(duì)HSC增殖的影響。應(yīng)用RT-PCR和ELISA方法檢測(cè)脂質(zhì)體介導(dǎo)的不同濃度NF-kBp65 ASODN(0、0.001、0.01、0.1、1μmol/L)對(duì)TNF-α刺激HSC產(chǎn)生ICAM-1及TGF-β1 mRNA和蛋白的影響，EMSA法檢測(cè)NF-kBp65ASO

3、DN對(duì)TNF-α刺激HSC的NF-kB活性影響。 結(jié)果:毒性實(shí)驗(yàn)表明NF-kBp65 ASODN在0.001～1μmol/L濃度對(duì)于體外培養(yǎng)傳代大鼠HSC無(wú)明顯毒性。TNF-α刺激HSC后，NF-kB活性和ICAM-1、TGF-β1的表達(dá)顯著性增強(qiáng)(P<0.05)；應(yīng)用NF-kBp65 ASODN(0.001～1.0μmol/L)作用后，NF-kB活性明顯減弱，且呈劑量依賴性(p<0.05)，同時(shí)TGF-β1、ICAM-1的mR