Egr-1誘騙寡核苷酸下調(diào)TGF-β-,1-抑制大鼠平滑肌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的: 通過向原代培養(yǎng)的大鼠動脈平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)中轉(zhuǎn)染針對早期生長反應(yīng)因子—1(early growth response factor—1，Egr—1)的誘騙寡核苷酸(early growth response factor—1 decoy oligonucleotide，Egr—1 decoy ODNs)，檢測Egr—1、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transformi

2、ng growth factors-Type beta1，TGF-β1)的表達(dá)變化及血管平滑肌細(xì)胞增殖的情況，探討針對Egr—1的decoy ODNs對體外培養(yǎng)的大鼠平滑肌細(xì)胞增殖的影響和作用機(jī)制。 方法: 通過組織塊貼壁法進(jìn)行原代大鼠動脈血管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)和鑒定，設(shè)計(jì)合成Egr—1誘騙寡核苷酸、誘騙對照寡核苷酸。細(xì)胞爬片后，應(yīng)用人工合成的針對Egr—1的decoy ODN進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染，S-P免疫細(xì)胞化學(xué)染色法

3、檢測前后，將培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞分為空白對照組(正常培養(yǎng)細(xì)胞)、誘騙組(等濃度的Egr—1的decoy ODN轉(zhuǎn)染組)、誘騙對照組(雜碼寡核苷酸轉(zhuǎn)然組，Egr—1 decoy ODN SCR)。用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測治療前后不同時間點(diǎn)(4h、24h、48h、72h)血管平滑肌細(xì)胞增殖情況與Egr—1及TGF-β1蛋白的表達(dá)變化，進(jìn)行MetaMorph圖像分析。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±

4、S)表示，各組間比較應(yīng)用單因素方差分析，p<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 成功進(jìn)行原代VSMC培養(yǎng)，經(jīng)細(xì)胞鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為高純度的VSMC。成功發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染及免疫組化染色后，進(jìn)行MetaMorph圖像分析。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：Egr—1在三個實(shí)驗(yàn)組中均有表達(dá)，4h表達(dá)最強(qiáng)，隨著時間的延長呈下降趨勢；TGF-β1在三個實(shí)驗(yàn)組內(nèi)4h開始表達(dá)，48h表達(dá)最強(qiáng)，之后隨時間延長呈下降趨勢。在不同時間點(diǎn)，誘騙組與對照組相比，均在一定程度上抑制了E