Egr-1特異脫氧核酶對大鼠主動脈平滑肌細胞Egr-1及PCNA的影響.pdf

1、目的: 早期生長反應(yīng)因子-1(early growth response-1，Egr-1)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控著多種與細胞增殖相關(guān)基因的表達，從而促進細胞的增殖和遷移。細胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在細胞周期的G1晚期開始增加，S期達高峰，對血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖進行著精細的調(diào)控，其表達水

2、平與細胞增殖程度成正比，因此檢測PCNA是評價細胞增殖狀態(tài)的可靠指標。脫氧核酶(deoxyribozyme/DNA enzyme，DRz)是繼核酶后發(fā)現(xiàn)的具有酶活性的脫氧核糖分子，它具有磷酸酯酶活性，可催化剪切特異的RNA。本實驗采用Egr-1特異脫氧核酶(10-23 DNA Enzyme，ED5)對體外培養(yǎng)的大鼠主動脈平滑肌細胞進行轉(zhuǎn)染，然后觀察其對Egr-1及PCNA表達的影響，從而探討ED5抑制血管平滑肌細胞增殖的作用機制。

3、 方法: 取Wistar大鼠胸主動脈中膜，用組織塊貼壁法進行VSMCs原代培養(yǎng)、鑒定并傳代。本實驗采用倒置相差顯微鏡法(形態(tài)學觀察)和α-平滑肌肌動蛋白抗體(α-SM-actin)免疫細胞化學染色法共同進行VSMCs的鑒定，證明成功培養(yǎng)的為高純度的血管平滑肌細胞，然后應(yīng)用FuGENE6轉(zhuǎn)染劑對VSMCs轉(zhuǎn)染ED5及ED5亂序雜碼寡核苷酸(ED5SCR)．并將實驗分為三組：對照組、ED5組、ED5SCR組，然后根據(jù)轉(zhuǎn)染時間不同另

4、分亞組。采用免疫細胞化學法觀察轉(zhuǎn)染后Egr-1及PCNA表達的情況，并采用MetaMorph圖像分析系統(tǒng)分析計算各組積分光密度值大小，最后采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果: 成功完成原代VSMCs培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染ED5及ED5SCR，然后根據(jù)轉(zhuǎn)染時間不同，分別觀察各組不同時間點的Egr-1及PCNA表達情況。實驗發(fā)現(xiàn)：經(jīng)10％胎牛血清刺激后，三組內(nèi)Egr-11h即開始表達，且表達最強，隨著時間的延長呈下降趨勢；

5、PCNA在三組內(nèi)4h開始表達，24h到最高峰，之后呈略下降趨勢。與對照組及ED5SCR組相比較，ED5組均在一定程度上抑制了Egr-1及PCNA的表達，實驗數(shù)據(jù)通過SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，證明有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論: Egr-1是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，可以促進VSMCs增殖；對體外成功培養(yǎng)的高純度VSMCs進行ED5轉(zhuǎn)染后，可以在一定程度上抑制Egr-1及PCNA表達。因此，ED5可以在一定