原發(fā)性肝癌外周血NK細(xì)胞受體NKG2D表達(dá)和NK細(xì)胞亞群分布的變化及意義.pdf

1、自然殺傷（NK）細(xì)胞是機(jī)體天然免疫系統(tǒng)的主要細(xì)胞成分之一，在抗病毒、抗腫瘤和移植排斥反應(yīng)中起著十分重要的作用。自然殺傷細(xì)胞受體G2D（NKG2D）是NK細(xì)胞表面的一種活化性受體，可激活NK細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷效應(yīng)。NK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的殺傷機(jī)制主要是通過Fas（CD95）和FasL（CD95L）相互作用、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）以及通過直接釋放細(xì)胞毒效應(yīng)分子穿孔素和顆粒酶B而破壞靶細(xì)胞。人類NK細(xì)胞的分化抗原

2、很多，其中具有代表性的細(xì)胞表型為CD3-、CD56+、CD16+[7，8]。人外周血約80-90％的NK細(xì)胞低密度表達(dá)CD56（CD56dim），同時(shí)高水平表達(dá)CD16（CD16brigh），可有效地發(fā)揮細(xì)胞毒作用；約10-20％的NK細(xì)胞表型為CD56brighCD16dim或CD56brighCD16-，其功能主要是分泌細(xì)胞因子，參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)。但在肝癌患者中，外周血NK細(xì)胞受體NKG2D和NK細(xì)胞亞群分布的變化如何，其對NK細(xì)

3、胞殺傷活性的影響又如何，文獻(xiàn)報(bào)道較少涉及，本研究就此進(jìn)行探討。 研究目的: 1.探討正常人外周血NK細(xì)胞亞群的生物學(xué)特性。 2.探討原發(fā)性肝癌患者外周血NK細(xì)胞受體NKG2D表達(dá)及NK細(xì)胞亞群分布的變化，并分析其對NK細(xì)胞殺傷活性的影響。 研究方法: 1.應(yīng)用流式細(xì)胞儀在單個(gè)細(xì)胞水平上分析正常人外周血NK細(xì)胞亞群的多樣性和生物學(xué)特征。 2.應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測分析20例原發(fā)性肝癌、23例乙型

4、肝炎后肝硬化、20例乙型肝炎及20例健康者的外周血NK細(xì)胞數(shù)量、其受體NKG2D的表達(dá)及NK細(xì)胞亞群的分布情況，并用酶標(biāo)儀檢測分析各組樣本NK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性。 研究結(jié)果: 1.根據(jù)CD56和CD16分子表達(dá)與否將NK細(xì)胞分為CD56+、CD56+CD16+和CD16+三個(gè)亞群。在健康人中，CD56+NK細(xì)胞表面CD95、NKG2D及細(xì)胞內(nèi)穿孔素+顆粒酶B的表達(dá)分別為22.2（18.0，29.0）％、53.4（47.1，

5、62.0）％、53.0（44.7，63.0）％，明顯低于CD56+CD16+NK細(xì)胞[39.9（35.8，44.9）％、69.1（63.8、76.7）％、95.9（89.5，99.3）％]和CD16+NK細(xì)胞[39.1（32.9，46.0）％、67.9（63.1，72.1）％、93.6（85.7，96.3）％]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而CD56+CD16+和CD16+NK細(xì)胞亞群之間則無明顯差異。因?yàn)镹K細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的殺傷機(jī)

6、制主要是通過Fas（CD95）和FasL（CD95L）相互作用以及直接釋放細(xì)胞毒效應(yīng)分子穿孔素和顆粒酶B而破壞靶細(xì)胞，因此該結(jié)果說明NK細(xì)胞殺傷作用主要通過CD56+CD16+和CD16+NK細(xì)胞進(jìn)行，其殺傷作用較單純CD56+細(xì)胞明顯強(qiáng)。 2.肝癌和肝硬化組CD56+NK細(xì)胞比例分別為16（12，29）％、18（13，25）％，均高于正常組10（8，18）％和乙肝組13（10，15）％，肝癌和肝硬化組CD56+CD16+NK細(xì)

7、胞比例分別為75（62，78）％、70（57，81）％，均低于正常組80（72，85）％和乙肝組79（71，82）％，而CD16+NK細(xì)胞四組間無明顯差異[正常組8（3，12）％，乙肝組8（4，11）％，肝硬化組7（5，15）％，肝癌組9（6，12）％]。由于CD56+CD16+和CD16+NK細(xì)胞的殺傷作用較單純CD56+NK細(xì)胞明顯強(qiáng)，因此本組結(jié)果提示肝癌和肝硬化患者NK細(xì)胞的殺傷作用較對照組及乙肝組明顯減弱。 3.原發(fā)性肝

8、癌患者的NK細(xì)胞殺傷率、NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞中NKG2D的表達(dá)水平及NK細(xì)胞數(shù)[（25±7）％、6（3，13）％、0.7（0.3，0.9）×107、15（11，30）、（1.1±0.6）×108]均明顯低于正常組[（63±7）％、36（28，44）％、8.3（7.0，10.6）×107、116（99，153）、（2.7±1.1）×108]和乙肝組[（41±8）％、16（12，24）％、2.8（

9、2.0，3.7）×107、49（31，72）、（1.9±1.1）×108]，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）；與肝硬化組[（29±10）％、7（4，15）％、0.6（0.3，1-7）×107、29（16，42）、（1.5±1.2）×108]比較也略低，但只有NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)水平兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余指標(biāo)包括NK細(xì)胞殺傷率、NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)及NK細(xì)胞數(shù)兩組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

10、 4.進(jìn)一步分級(jí)比較，肝癌組Child B級(jí)和C級(jí)NK細(xì)胞殺傷率、NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞中NKG2D的表達(dá)水平分別為ChildB：（27±5）％，6.1（3.2，11.9）％，0.7（0.5，0.9）×107，14（12，23）；ChildC：（17±2）％，3.0（1.1，5.6）％，0.2（0.1，0.3）×107，6（4，18），均分別較肝硬化組[Child B：（39±9）％，12.4（

11、8.7，25.6）％，2.0（1.3，3.0）×107，39（30，83）；Child C：（25±6）％，4.5（2.2，11.0）％，0.4（0.3，0.7）×107，20（14，37）]低，其中NK細(xì)胞殺傷率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞中NKG2D的表達(dá)水平在肝癌Child B與肝硬化Child B、肝癌ChildC與肝硬化Child C兩組間差異顯著，但NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率兩組間差異無顯著性；肝癌組和肝硬化組Ch

12、ild B級(jí)NK細(xì)胞殺傷率、NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞中NKG2D的表達(dá)水平均較Child C級(jí)高，其中NK細(xì)胞殺傷率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞中NKG2D的表達(dá)水平在肝癌Child B與肝癌Child C、肝硬化Child B與肝硬化Child C兩組間差異顯著，但NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率兩組間差異無顯著性，P>0.05。 5.肝癌組Child B級(jí)NK細(xì)胞數(shù)和NK細(xì)胞亞群C

13、D56+NK、CD56+CD16+NK、CD16+NK構(gòu)成比分別為：（1.2±0.6）×108、15.4（11.2，35.5）％、74.3（55.5，77.0）％、9.8（6.4，11.8）％，肝癌組Child C級(jí)分別為：（0.8±0.4）×108、16.4（15.3，17.7）％、76.4（70.3，77.9）％、8.5（4.4，13.6）％，肝硬化組Child B級(jí)分別為：（1.8±1.5）×108、19.7（12.9，22.5）

14、％、72.1（56.0，80.4）％、13.2（4.2，21.5）％，肝硬化組Child C級(jí)分別為：（1.2±0.9）×108、16.7（13.0，30.0）％、70.2（57.6，82.9）％、6.7（4.0，14.1）％，其在肝癌Child B與肝硬化Child B、肝癌Child C與肝硬化Child C、肝癌Child B與肝癌Child C、肝硬化Child B與肝硬化Child C四組間差異無顯著性。 6.NK細(xì)胞

15、的活性與NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)水平、NK細(xì)胞數(shù)及NK細(xì)胞中CD56+CD16+NK比例均呈正相關(guān)關(guān)系（n=83例），與NK細(xì)胞中CD56+細(xì)胞比例呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。肝癌組和肝硬化組Child-pugh積分與NK細(xì)胞活性、NK細(xì)胞NKG2D的陽性表達(dá)率、NKG2D+NK細(xì)胞數(shù)、NK細(xì)胞NKG2D的表達(dá)水平及NK細(xì)胞數(shù)均呈負(fù)相關(guān)性。 結(jié)論: 1.NK細(xì)胞乃異質(zhì)性群體，隨著