乳腺癌患者外周血NK細(xì)胞受體NKG2A、NKG2D檢測(cè)的臨床意義.pdf

1、目的：乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤。我國(guó)雖是乳腺癌的低發(fā)地區(qū)，但發(fā)病率正在逐年上升，發(fā)病年齡正在趨向年輕化，而死亡率久無(wú)降低，其發(fā)展與危害不容忽視。自然殺傷(natural killer，NK)細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)的主要效應(yīng)細(xì)胞。NK細(xì)胞功能活性的發(fā)揮取決于活化性和抑制性信號(hào)的綜合。NKG2家族是NK細(xì)胞表面的一類重要受體。NKG2A是NKG2家族中唯一的抑制性受體，而NKG2D為活化性受體。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)37例乳腺癌及13例乳

2、腺良性疾病患者NK細(xì)胞表面受體NKG2A、NKG2D，同時(shí)檢測(cè)免疫功能，并結(jié)合臨床病理因素(病理類型、組織學(xué)分級(jí)、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期及C-erbB2表達(dá)情況)作比較分析。旨在探討乳腺癌與乳腺良性疾病患者外周血NK細(xì)胞表面受體NKG2A與NKG2D的平衡狀態(tài)，分析探討宿主NK細(xì)胞受體與腫瘤免疫逃逸的關(guān)系，對(duì)乳腺癌患者的免疫功能狀態(tài)、估計(jì)病情及預(yù)后判斷有一定臨床價(jià)值。 方法：選取2007年5月至2007年10月在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院

3、外一科診治的乳腺癌患者37例，乳腺良性疾病患者13例，年齡18～70歲。所有患者術(shù)前均未經(jīng)過(guò)任何治療。其中乳腺癌組：①根據(jù)病理分為：浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌21例，浸潤(rùn)性小葉癌10例，其他類型乳腺癌6例；②根據(jù)腋淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移分為：無(wú)轉(zhuǎn)移患者15例、1～3枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者8例，≥4枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者14例；③根據(jù)C-erbB2表達(dá)情況分為：C-erbB2低表達(dá)(-～+)患者20例，C-erbB2高表達(dá)(++～+++)患者17例；④根據(jù)臨床病理分期

4、分為：I期患者8例、II期患者23例、III+IV期患者6例；⑤根據(jù)免疫功能分為：免疫功能正常組23例，免疫功能低下組14例。⑥根據(jù)組織學(xué)分級(jí)分為：高分化(I級(jí))組15例，中分化(II級(jí))組15例，低分化(III級(jí))組7例。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)選取乳腺癌及乳腺良性疾病患者血樣標(biāo)本檢測(cè)NK細(xì)胞表面受體NKG2A、NKG2D，同時(shí)留取血標(biāo)本進(jìn)行免疫功能檢測(cè)。于手術(shù)前抽取空腹靜脈血2ml，EDTA抗凝，6小時(shí)內(nèi)處理。首先進(jìn)行外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離

5、，再應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)采用三色直接免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)NK細(xì)胞表面受體NKG2A、NKG2D。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用Expo 32ADC軟件進(jìn)行分析，得到熒光標(biāo)記陽(yáng)性細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。 結(jié)合患者的病理類型、組織學(xué)分級(jí)、腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期、免疫功能及C-erbB2表達(dá)情況等因素進(jìn)行相關(guān)分析。 統(tǒng)計(jì)分析運(yùn)用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以x±s表示。兩個(gè)樣本均數(shù)的比較應(yīng)用t檢驗(yàn)(t-test)。多組樣本均數(shù)的差別的多重比較應(yīng)用S

6、NK-q檢驗(yàn)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.本研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者NK細(xì)胞表面受體NKG2A、NKG2D的表達(dá)率(％)分別為40.51±8.30、93.87±3.41。乳腺良性疾病患者NKG2A、NKG2D的表達(dá)率(％)分別為22.67±7.31、99.05±0.65。乳腺癌患者NKG2A、NKG2D的表達(dá)率與乳腺良性疾病患者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 2.乳腺癌患者CD3+、CD4+、CD

7、8+、CD56+細(xì)胞百分比分別為58.39±3.60、37.95±7.16、22.98±8.28、17.20±4.47；CD4+/CD8+比值為2.04+1.02。乳腺良性疾病患者CD3+、CD4+、CD8+、CD56+細(xì)胞百分比分別為65.55±8.57、58.39±3.60、46.48±5.74、12.53±2.51；CD4+/CD8+比值為2.00±0.65。乳腺癌患者CD3+、CD4+、CD56+細(xì)胞百分比與乳腺良性疾病患者相比

8、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；CD8+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值兩組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 3.免疫功能正常的乳腺癌患者NKG2A、NKG2D的表達(dá)率(％)分別為41.12±7.77、94.99±3.60。免疫功能低下的乳腺癌患者NKG2A、NKG2D的表達(dá)率(％)分別為40.21±8.19、92.10±1.94。兩組間NKG2A表達(dá)率無(wú)顯著差異(P＞0.05)，而NKG2D表達(dá)率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)

9、。 4 I期、II期、III+IV期乳腺癌患者的NKG2A表達(dá)率(％)分別為36.78±11.29、36.50±6.19、51.94±9.16。III+IV期乳腺癌患者NKG2A的表達(dá)率分別與I期、II期患者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；I期與II期患者的表達(dá)率相比，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。I期、II期、III+IV期乳腺癌患者的NKG2D表達(dá)率(％)分別為98.13±1.00、92.50±2.88、92.43±2

10、.02。三組間的NKG2D表達(dá)率的比較，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。 5 本研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌腋淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組、1～3枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及≥4枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的NKG2A表達(dá)率(％)分別為42.07±8.02、42.36±5.74、38.53±8.41。三組間的NKG2A表達(dá)率相比，無(wú)顯著變化(P＞0.05)。乳腺癌腋淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組、1～3枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及≥4枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的NKG2D表達(dá)率(％)分別為97.34±2.08、92

11、.97±1.69、90.74±0.89。NKG2D的表達(dá)率在三組之間進(jìn)行兩兩比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 6 浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，浸潤(rùn)性小葉癌及其他類型乳腺癌患者的NKG2A表達(dá)率(％)分別為41.47±7.57、35.58±7.94、46.34±7.39。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌，浸潤(rùn)性小葉癌及其他類型乳腺癌患者的NKG2D表達(dá)率(％)分別為94.74±3.43、92.24±2.56、93.72±3.39。NKG2A、NKG2D的表

12、達(dá)率在乳腺癌不同病理類型之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 7 高分化(Ⅰ級(jí))、中分化(Ⅱ級(jí))、低分化(Ⅲ級(jí))乳腺癌的NKG2A表達(dá)率(％)分別為41.74±7.96、39.88±8.45、40.62±6.40。高分化、中分化、低分化乳腺癌的NKG2D表達(dá)率(％)分別為93.98±3.85、93.38±3.01、94.75±2.91。NKG2A、NKG2D的表達(dá)率在乳腺癌不同組織學(xué)分級(jí)之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.0

13、5)。 8 乳腺癌患者中C-erbB2低表達(dá)組(-～+)、C-erbB2高表達(dá)組(++～+++)的NKG2A表達(dá)率(％)分別為38.53±7.99、43.42±7.02。NKG2D表達(dá)率(％)分別為93.71±3.35、94.12±3.41。NKG2A的表達(dá)率在兩組之間進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而NKG2D無(wú)顯著變化(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.乳腺癌患者外周血NK細(xì)胞表面活化性受體NKG2D

14、表達(dá)下降，而抑制性受體NKG2A的表達(dá)上調(diào)，即NKG2A和NKG2D的平衡狀態(tài)的改變是導(dǎo)致機(jī)體免疫監(jiān)視功能下降的重要因素之一。 2.乳腺癌患者CD3+、CD4+細(xì)胞百分比明顯低于乳腺良性疾病患者，而NK細(xì)胞(CD56+細(xì)胞)明顯高于良性患者。表明乳腺癌患者T細(xì)胞免疫功能低下，細(xì)胞免疫功能狀態(tài)紊亂。而乳腺癌患者NK細(xì)胞百分率明顯增加，提示可能與NK細(xì)胞的抑制性受體活性增強(qiáng)及活化性受體減弱有關(guān)。 3.本研究發(fā)現(xiàn)NKG2D的表

15、達(dá)率在腋淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移組、1～3枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及≥4枚腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組之間相比，有明顯下降趨勢(shì)，提示NK細(xì)胞表面受體NKG2A與NKG2D的不平衡表達(dá)與乳腺癌患者病情的進(jìn)展有一定的相關(guān)性。 4 本研究結(jié)果顯示Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者與I、Ⅱ期患者的NKG2A表達(dá)相比，有上升趨勢(shì)；而NKG2D的表達(dá)無(wú)明顯變化。 5 本研究未發(fā)現(xiàn)NKG2A、NKG2D的表達(dá)與乳腺癌的不同病理類型及組織學(xué)分級(jí)之間有明確的相關(guān)性。 6 本研究提