SP物質(zhì)對(duì)NK92-MI細(xì)胞NKG2A和NKG2D分子表達(dá)的影響.pdf

1、P物質(zhì)(Substance P，SP)是神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)反應(yīng)時(shí)分泌的一種生物活性多肽，廣泛分布于細(xì)的初級(jí)傳入神經(jīng)纖維內(nèi)。軀體和精神刺激作用于神經(jīng)系統(tǒng)時(shí)，既可通過(guò)神經(jīng)的直接作用影響免疫系統(tǒng)的功能活動(dòng)，也可通過(guò)釋放內(nèi)分泌激素或其它細(xì)胞因子對(duì)免疫功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，而經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)肽則是直接作用于免疫活性細(xì)胞和其他參與免疫反應(yīng)細(xì)胞的重要調(diào)節(jié)物質(zhì)。SP的生物活性是通過(guò)與速激肽受體（NK-R)的亞型NK-1(neuorkinin-1)，NK-2，NK

2、-3的結(jié)合表現(xiàn)出來(lái)的。 SP與臨床的多種疾病有關(guān)，SP在不同條件下所引起的作用具有復(fù)雜性和多樣性。進(jìn)一步研究SP在神經(jīng)內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)中的具體作用機(jī)制會(huì)對(duì)炎性疾病及免疫性疾病的病理生理本質(zhì)有更新的認(rèn)識(shí)，以期對(duì)臨床防治有所幫助。 NK細(xì)胞是天然免疫系統(tǒng)中一類十分重要的淋巴細(xì)胞，在機(jī)體抗感染、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)及造血系統(tǒng)等方面發(fā)揮重要作用。NK細(xì)胞通過(guò)細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒殺傷非己細(xì)胞，并通過(guò)釋放多種細(xì)胞因子(如IFN，GM-CSF

3、和TNF)和趨化因子調(diào)節(jié)天然免疫和獲得性免疫。NK細(xì)胞的殺傷活性由其抑制性受體和活化受體調(diào)控。 SP在體內(nèi)體外均可調(diào)節(jié)多種免疫功能，但SP對(duì)NK細(xì)胞功能影響的報(bào)道較少。為此，我們檢測(cè)了SP是否可以促進(jìn)NK細(xì)胞增殖和殺傷活性，并測(cè)定SP對(duì)NKG2A/D表達(dá)的影響，以研究SP對(duì)NK細(xì)胞功能的影響及可能的作用機(jī)制。 材料和方法 1、細(xì)胞培養(yǎng)和處理，收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞加不同濃度P物質(zhì)培養(yǎng)24h； 2、MTT法檢測(cè)不同

4、濃度SP(10-6mol/L，10-8mol/L，10-9mol/L，10-10mol/L，10-12mol/L，10-14mol/L)對(duì)NK92-MI細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響； 3、MTT釋放法測(cè)定不同濃度P物質(zhì)對(duì)NK92-MI細(xì)胞殺傷活性的影響； 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)比較NK92-MI細(xì)胞抑制性受體NKG2A和活化性受體NKG2D的膜表達(dá)情況； 5、RT-PCR檢測(cè)比較NKG2A和NKG2D的mRNA表達(dá)水平。

5、 結(jié)果： 1、10-6M-10-10M濃度的SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞的增殖和活力有促進(jìn)作用，與對(duì)照組比較有顯著性差異。 2、SP在10-6mol/L，10-8mol/L，10-14mol/L濃度時(shí)，作用24h后，實(shí)驗(yàn)組的DNA合成前期細(xì)胞所占百分比(G1％)下降，而DNA合成期細(xì)胞所占百分比(S％)增高，反應(yīng)增殖活力的增殖指數(shù)PrI值有明顯增加；10-4mol/L的SP使S期細(xì)胞比例下調(diào)，G1期百分比增加。

6、 3、效靶比為4:1時(shí)，各濃度SP對(duì)NK細(xì)胞殺傷活性顯示有增強(qiáng)作用，此作用強(qiáng)度隨SP濃度的增加而降低。效靶比1：1時(shí),SP對(duì)NK92-MI細(xì)胞殺傷活性的影響不明顯。 4、SP與NK92-MI細(xì)胞共孵育24 h，F(xiàn)CAS檢測(cè)結(jié)果表明，NKG2A在10-8-10-12M濃度SP作用下NKG2A表達(dá)均有上調(diào)，當(dāng)SP在10-14M濃度時(shí)，NKG2A的表達(dá)下調(diào)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NKG2D各組SP濃度較對(duì)照組均有不同程度上調(diào)。 5

7、、各濃度SP與NK92-MI細(xì)胞共孵育24h，采用RT-PCR方法對(duì)部分功能受體mRNA表達(dá)變化情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示NKG2A各濃度SP組較對(duì)照組mRNA均有不同程度增強(qiáng)；各濃度組NKG2D的mRNA表達(dá)均有上調(diào)。 結(jié)論： 一定范圍濃度的SP對(duì)NK92MI細(xì)胞的增殖有促進(jìn)影響(存在劑量依賴性)。一定濃度的SP能夠增強(qiáng)NK92-MI細(xì)胞的殺傷活性，各濃度SP均上調(diào)NKG2D的膜表達(dá)水平和mRNA水平(兩者變化趨勢(shì)完全一致