P53基因干擾NKG2D配體在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：NKG2D是介導(dǎo)NK細(xì)胞識(shí)別和溶解腫瘤細(xì)胞的主要活化型受體，表達(dá)于所有的NK細(xì)胞表面。NKG2D的配體在多種腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，其在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的表達(dá)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)RB細(xì)胞上NKG2D配體的表達(dá)情況，及超聲微泡介導(dǎo)P53基因轉(zhuǎn)染RB細(xì)胞后NKG2D配體表達(dá)的變化，探討抑制腫瘤途徑中誘導(dǎo)腫瘤凋亡和免疫殺傷兩者之間是否存在協(xié)同作用，為RB的免疫研究提供新思路。 方法： 1.以K562細(xì)胞為RB細(xì)胞的對(duì)照組，采

2、用RT-PCR法檢測(cè)RB、K562細(xì)胞表面NKG2D配體的表達(dá)情況。 2.以Ficoll密度梯度離心法分離的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）作為效應(yīng)細(xì)胞，RB和K562細(xì)胞作為靶細(xì)胞，MTT法檢測(cè)NK細(xì)胞對(duì)RB、K562細(xì)胞的殺傷活性。 3.以0.5W/c㎡聲強(qiáng)、輻照時(shí)間30s、連續(xù)波輻照超聲微泡攜帶wtp53基因轉(zhuǎn)染RB細(xì)胞。 4.RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染基因組和空質(zhì)粒組二組細(xì)胞表面NKG2D（MICA、MICB、U

3、LBP1、ULBP2、ULBP3）配體的表達(dá)變化。 5.流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染組與空質(zhì)粒組RB細(xì)胞的凋亡情況。 結(jié)果： 1、K562細(xì)胞上表達(dá)NKG2D配體MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3；RB細(xì)胞上表達(dá)NKG2D配體MICA、MICB、ULBP2、ULBP3，不表達(dá)ULBP1。K562、RB細(xì)胞表面NKG2D的配體mRNA表達(dá)強(qiáng)度平均光密度比值K562細(xì)胞明顯強(qiáng)于RB細(xì)胞（P<0.05）。MT

4、T結(jié)果顯示，在各效靶比時(shí)NK細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞的殺傷活性較RB細(xì)胞明顯增強(qiáng)（P<0.05）。 2、轉(zhuǎn)染P53基因后，RB細(xì)胞上表達(dá)MICA、MICB、ULBP2，不表達(dá)UIBP1、ULBP3，且轉(zhuǎn)染抑癌基因后NKG2D配體的表達(dá)較轉(zhuǎn)染前明顯下調(diào)。轉(zhuǎn)染P53基因后RB細(xì)胞凋亡增加。 結(jié)論： 1、NKG2D配體可在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞上表達(dá)。 2、NKG2D配體影響NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷活性，NKG2D的配體表