太空誘變宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)研究.pdf

1、目的：研究太空誘變宮頸癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，從太空誘變的宮頸癌細(xì)胞和地面對照細(xì)胞的差異表達(dá)基因探討太空誘變宮頸癌細(xì)胞生物學(xué)行為改變的原因。 方法：將搭載于“神舟四號”飛船飛行7天返地后的宮頸癌Caski細(xì)胞進(jìn)行單克隆化，觀察細(xì)胞形態(tài)、MTT法測定細(xì)胞生長曲線初步篩選出變異株并測定其倍增時間、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期、軟瓊脂細(xì)胞集落培養(yǎng)和裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)檢測空間誘變細(xì)胞的惡性表型。分別抽提經(jīng)太空誘變的宮頸癌細(xì)胞和地面對照細(xì)胞的總RNA，逆

2、轉(zhuǎn)錄cDNA并標(biāo)記探針，將實(shí)驗(yàn)組和對照組cDNA探針混合與一張含2，747個人類腫瘤相關(guān)基因的Oligo雙通道芯片雜交后分別用不同的波長掃描熒光強(qiáng)度，從而篩選出差異表達(dá)基因。從差異表達(dá)基因中分別挑選若干基因采用半定量RT-PCR并進(jìn)行擴(kuò)增，凝膠電泳后，對電泳圖進(jìn)行灰度掃描驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。 結(jié)果：單克隆化后獲得1440株細(xì)胞克隆，發(fā)現(xiàn)空間誘變株出現(xiàn)多種細(xì)胞形態(tài)；MTT法篩選出4株變異株，其中有兩株編號為44F10和17E3的細(xì)胞

3、克隆生長速度快于對照組，其細(xì)胞周期分布改變，Gl期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增多；而另兩株編號為48A9和31F2的細(xì)胞克隆生長速度慢于對照組，其細(xì)胞周期分布規(guī)律與以上兩株相反；地面正常對照細(xì)胞、地面模擬對照細(xì)胞、44F10、17E3、48A9、31F2細(xì)胞的平均倍增時間依次為56.54h、58.44h、52.96h、5l.46h、101.76h、88.47h；軟瓊脂細(xì)胞集落形成率依次為9.7％、9.3％、14.7％、12.1％、0和0.1％，

4、誘變細(xì)胞與對照細(xì)胞之間的差異有顯著性(P<0.05)；將六組細(xì)胞分別注射入裸鼠體內(nèi)，47天后處死動物，剝離出腫瘤組織并稱重，各組瘤塊平均重量依次為0.06596g、0.06558g、0.1749g、0.2487g、O.01074g、0.0184g，變異組與兩對照組的細(xì)胞成瘤能力比較，差異有顯著性(P<0.05)。 挑選44F10組，48A9組與地面對照組進(jìn)行基因表達(dá)差異的分析。44F10組與地面對照比較有16個基因呈現(xiàn)差異表達(dá)，