CD40分子在人宮頸癌組織中表達的臨床意義及CD40信號對宮頸癌細胞株SiHa體外的生物學效應.pdf

1、子宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤，發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居第二位，僅次于乳腺癌。近幾年國內外報道宮頸癌的發(fā)病率和病死率有年輕化的傾向，35歲以下的婦女宮頸癌發(fā)病率明顯上升。因此對宮頸癌病因、發(fā)病機制的研究，以及尋求更敏感的宮頸癌早期診斷、更有效的治療方法成為非常必要。 CD40是分子量48KD的細胞表面分子，表達于許多類型細胞中，包括B細胞、樹突狀細胞、單核細胞、內皮細胞以及一系列腫瘤細胞。CD40屬于腫瘤壞死因子受體（TNFR）超

2、家族成員。CD40分子的配體CD40L主要表達于活化的CD4+T輔助（Th）細胞。CD40L/CD40相互作用是特異性免疫應答及其過程中主要的協(xié)同刺激信號。大量研究表明，CD40分子可以介導B細胞的增殖、分化、抗體分泌及其類型轉換、樹突狀細胞的激發(fā)及分化成熟，內皮細胞粘附分子的改變，炎癥因子的釋放以及白細胞在炎癥部位的聚集等。這表明CD40是免疫反應中的重要分子。 本研究主要探討CD40及其相關分子在宮頸癌組織上的表達及其臨床生

3、物學意義；討論宮頸癌細胞株SiHah表達CD40及其生物學影響；CD40對用于宮頸癌治療的化療藥物敏感性的影響。期望尋找宮頸癌腫瘤個性化免疫治療的新方案。 一、CD40及其相關分子在宮頸癌中的表達及生物學意義目的：研究宮頸癌組織中CD40分子的表達、并探討其與宮頸癌侵襲、淋巴結轉移等生物學行為的相關性，分析HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34分子在宮頸癌組織中的表達及其與CD40表達的相關性。方法：采用免疫

4、組織化學方法，對239例宮頸組織標本切片（包括正常子宮頸組織38例，慢性宮頸炎43例，宮頸上皮內瘤變CINⅠ級36例，CINⅡ級39例，CINⅢ級27例，宮頸鱗狀上皮癌56例）檢測CD40分子的表達；同時檢測了HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF、CD34在宮頸組織中的表達。結果：CD40分子在正常宮頸組織、慢性宮頸炎組織和CINⅠ～Ⅱ上不表達或弱表達，而CINⅢ和宮頸癌組織上表達明顯增加，陽性率分別達55.55%和67.8

5、6%，差異有顯著性（p<0.01）。CD40分子在宮頸癌中的表達與宮頸癌的FIGO臨床分期（r=0.05，p>0.05）、病理分級（r=—0.12，p>0.05）無相關性，而與腫瘤肌層浸潤深度（r=0.44，p<0.01）、有無淋巴轉移（r=0.30，p<0.05）有明顯的相關性。宮頸癌組織中HPV16/18E6、p16INK4a、VEGF分子表達均較正常組織高（78.60、80.36%、87.50%）。CD34MVD在宮頸癌組織上表達

6、為27.02±10.68，明顯較其它各組增高（p<0.001）。HPV16/18—E6陽性表達的宮頸CINⅡ～Ⅲ組織中，P16INK4a表達陽性者占90.47%，HPV16/18—E6陽性表達的宮頸癌組織中，P16INK4a表達陽性達97.72%，因此P16INK4a在宮頸CINⅡ～Ⅲ及宮頸癌中的表達和HPV16/18—E6的陽性表達有明顯的相關性（r=0.362，p<0.05；r=0.837，p<0.01）。CD40分子的表達和P16

7、INK4a的表達呈正相關（r=0.52，p<0.01）；和HPV16/18—E6、VEGF以及CD34MVD的表達亦有一定的正相關性（r=0.57，p<0.01；r=0.32，p<0.05；r=0.37，p<0.05）。結論：CD40可作為宮頸癌診斷、預后和淋巴結轉移評估的客觀指標。CD40分子表達與抑癌基因p16INK4a、HPV16/18—E6以及VEGF和CD34MVD的表達有一定的正相關性，由此提示CD40分子在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)

8、展過程中可能起著非常重要的作用。 二、激發(fā)型CD40單抗對宮頸癌細胞株體外增殖和化學藥物敏感性的作用目的：研究CD40分子激發(fā)對宮頸癌細胞SiHa化療敏感性的影響及其機制。 方法：采用流式細胞術檢測宮頸癌細胞SiHa上CD40分子的表達，MTT法檢測CD40單抗（5C11）聯(lián)合化療藥物對SiHa細胞的作用，PI染色檢測SiHa細胞周期的變化，AnnexinⅤ—PI法檢測細胞凋亡、Real—timePCR方法分析單抗5C1

9、1作用SiHa細胞后凋亡基因表達水平變化。結果：宮頸癌SiHa細胞表面CD40表達率為96.0%，SiHa細胞經5C11作用后出現(xiàn)G2/M期阻滯，5C11和化療藥物鹽酸吉西他濱（Gemcitabin）各自抑制細胞生長作用不明顯，但兩者聯(lián)合能顯著抑制SiHa的生長和促進凋亡。SiHa細胞在和5C11作用24小時后，抗調亡基因BCL—XL的表達明顯下調，促調亡基因BAX的上調作用不明顯。結論：CD40分子通過介導G2/M期阻滯和調節(jié)凋亡基因