SV40T定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠胃泌素與P53表達(dá)的研究.pdf

1、胃癌是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,其發(fā)病率及病死率均較高。建立較好的模擬胃癌發(fā)生發(fā)展的動(dòng)物模型對(duì)于研究胃癌的發(fā)生、發(fā)展及治療具有十分重要的意義。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是通過把外源基因?qū)氲絼?dòng)物基因組內(nèi),促使外源基因與動(dòng)物本身的染色體整合,使外源基因在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)得到表達(dá)并穩(wěn)定的遺傳給后代的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,它可以從動(dòng)物整體水平觀察所轉(zhuǎn)入基因的生物學(xué)效應(yīng),能夠更好的研究疾病的發(fā)生發(fā)展過程。因此胃癌轉(zhuǎn)基因動(dòng)物將對(duì)于胃癌研究具有較好的價(jià)值。
　　 SV4

2、0T基因是一種存在于SV40病毒內(nèi)的腫瘤基因,由于SV40T基因經(jīng)過轉(zhuǎn)錄后可以產(chǎn)生T蛋白,該蛋白可以通過結(jié)合并失活抑癌基因p53及Rb促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化和癌變,因此SV40T基因被廣泛的用于制備腫瘤轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。本課題已經(jīng)通過真核載體的構(gòu)建、ATPaseβ promoter/SV40T基因片段注射以及篩選初步建立了8個(gè)品系的SV40T胃壁細(xì)胞定位表達(dá)的胃癌轉(zhuǎn)基因小鼠。然而要建立符合胃癌研究的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型仍需對(duì)8個(gè)初建品系的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)行進(jìn)

3、一步研究及篩選。
　　 目的：
　　 本研究通過胃泌素檢測、胃組織P53蛋白表達(dá)的研究以及胃組織病理學(xué)分析對(duì)8個(gè)品系SV40T胃壁細(xì)胞定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠的生物學(xué)特性進(jìn)行研究。
　　 方法：
　　 1.檢測空腹血漿胃泌素:取8個(gè)品系SV40T胃壁細(xì)胞定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠及正常對(duì)照組B6鼠空腹血漿,ELISA法檢測血漿胃泌素。
　　 2.RT-PCR檢測胃竇胃泌素mRNA表達(dá):獲取8個(gè)品系SV40T胃壁

4、細(xì)胞定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠及正常對(duì)照組B6鼠的胃竇部組織,提取總RNA后,應(yīng)用RT-PCR檢測胃泌素mRNA表達(dá)。
　　 3.免疫組化檢測胃組織P53蛋白的表達(dá):獲取8個(gè)品系SV40T胃壁細(xì)胞定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠及正常對(duì)照組B6鼠胃組織,免疫組織化學(xué)法檢測組織中的p53蛋白表達(dá)。
　　 4.病理學(xué)分析:對(duì)8個(gè)品系SV40T胃壁細(xì)胞定位表達(dá)轉(zhuǎn)基因小鼠的胃組織進(jìn)行病理學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.8個(gè)品系轉(zhuǎn)基因

5、小鼠空腹血漿胃泌素平均值均比對(duì)照組低,其中2＃、4＃、24＃、51＃及73＃品系轉(zhuǎn)基因小鼠與對(duì)照組相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.8個(gè)品系轉(zhuǎn)基因小鼠胃竇部胃泌素mRNA表達(dá)均比對(duì)照組減少。
　　 3.8個(gè)品系轉(zhuǎn)基因小鼠胃組織內(nèi)P53蛋白表達(dá)量均較對(duì)照組B6鼠增多,其中4＃、24＃、51＃、73＃與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.8個(gè)品系轉(zhuǎn)基因小鼠胃粘膜組織均有不同程度的病理學(xué)改變,部分呈現(xiàn)癌前期變化。其中5