梭羅草AFLP多態(tài)性分析及指紋圖譜構(gòu)建.pdf

1、本研究以青海高寒草原鄉(xiāng)土植物梭羅草（Kengyilia thoroldiana）為主要研究材料，并與近緣物種大穎草（K. grandiglumis）、糙毛以禮草（K. hirsuta）、疏花以禮草（K. laxiflora）和硬桿以禮草（K. rigidula）進(jìn)行對(duì)比，建立并優(yōu)化梭羅草的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）反應(yīng)體系，通過(guò) AFLP分子標(biāo)記技術(shù)分析梭

2、羅草的居群間及個(gè)體間的多樣化水平，構(gòu)建梭羅草的AFLP指紋圖譜。研究結(jié)果如下：
　　利用梭羅草基因組DNA優(yōu)化并建立的梭羅草AFLP反應(yīng)體系為：預(yù)擴(kuò)增反應(yīng)體系（25μl）：連接產(chǎn)物1μl；10×PCRBuffer2.5μl；dNTPs0.375μl；Mg2+1μl；TaqDNA聚合酶0.5μl；EcoR I預(yù)擴(kuò)引物1μl；Mse I預(yù)擴(kuò)引物1.2μl；ddH2O加至25μl。選擴(kuò)增反應(yīng)體系（25μl）：預(yù)擴(kuò)產(chǎn)物（稀釋20倍）2.0

3、μl，10×PCRBuffer2.5μl；dNTPs0.60μl；Mg2+2μl；TaqDNA聚合酶0.1μl；EcoR I選擴(kuò)引物1.5μl；Mse I選擴(kuò)引物2.5μl；ddH2O加至25μl。
　　利用優(yōu)化后的AFLP體系，用216對(duì)E/M組合的引物對(duì)梭羅草（8個(gè)居群）和大穎草、疏花以禮草各1個(gè)居群共10份供試材料進(jìn)行了引物篩選，篩選出了38對(duì)具有多態(tài)性的引物，其中6對(duì)擴(kuò)增條帶清晰，鑒別效率高，用這6對(duì)引物構(gòu)建了梭羅草的指紋

4、圖譜。引物組合E16C4和E4C10的擴(kuò)增條帶中均有梭羅草的特征條帶，可用于梭羅草的種質(zhì)鑒定和純度鑒定。組合 E16C4、E3C16擴(kuò)增出的8個(gè)多態(tài)性條帶可以將10份供試材料彼此區(qū)分。
　　利用AFLP技術(shù)對(duì)12個(gè)梭羅草居群和4個(gè)近緣草種居群進(jìn)行遺傳多樣性研究。用38對(duì)AFLP引物對(duì)16個(gè)居群進(jìn)行遺傳多樣性分析，擴(kuò)增出122個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)。12個(gè)梭羅草居群間的遺傳同一性變異范圍為0.6837-0.8859，遺傳距離變異范圍為0.12