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1、萊陽(yáng)農(nóng)學(xué)院碩士學(xué)位論文山東主栽果樹(shù)AFLP指紋圖譜的構(gòu)建EstablishmentofAFLPFingerprintingOilFruitTreesMainlyCultivatedinShandong研究生姓名導(dǎo)師姓名專(zhuān)業(yè)研究方向瑚海騰祝軍教授果樹(shù)學(xué)生物技術(shù)AbstractFifty—threevarietiesbelongtofourkindoffruittreesmainlycultivatedinShandongincluding
2、apple(MaluspumilaMill),pear(聊nL),peach(PpelsicaBatch)andjujube(ZiziphusjujubeMill),wereusedinthisexperimentTheDNAfingerprintingofthesefiftythreevarietieswereestablishedbyusingAFLPtechnologyTheidentificationofthesefiftyth
3、reevarieties,andthehereditaryrelationsanalysiswerealsomadebasedontheirDNAfingerprintingThegenomicDNAoftheseexperimentmaterialswereextractedbymodifiedCTABmethodThecomponentsofmodifiedisolationbufferare:3%CTAB14mol/LNaCl,2
4、0mmol/LEDTA,100mmol/LTriSHCI(pH80),2%p—MercaptoethanalThegenomicDNAwaspurifiedbyphenol/chloroform/isoamylalcohol(twice),andtheRNAiseliminatedfromthesolutionwithRNasefinallythegenomicDNAwaspurifiedbychloroform/isoamylalco
5、hol(once)TheextractedgenomicDNAoffruittreeswassuitableforAFLPanalysisAftersystematicallystudyingonthemainfactorsincludingquantitiesofenzymereactiontime,linkagetimeandSOon,anAFLPsilver—staininganal37sissystemforfruittrees
6、genomicDNAwasestablished:ThepurifiedfruitgenomicDNA200500ngNEBBuffer25pL,BSAO259L,EcoRI(20U/gL)25I_tL,MseI(10U/uL)O5pkEcoR,adapter(5pMol/gL)1OlaL,MseIadapter(50pMol/gL)1OL,andaddedddH20to509L,andincubatedat37。CovernightT
7、helinkedproductswereusedasforpre—anlplificationThepreamplifiedproductsw£sdiluted20times、“thddH20andusedasforselectiveamplificationAttheendoftheselectiveamplification,thefruittreessamplesweredenaturedby79LLoadingbufferand
8、heatedup95℃for5min,thencooledoniceimmediatelyThePCRreactionproductswereanalyzedon60%denaturalacrylamide/bisacrylimadegelsbysilverstainingEightpairsofprimerswereselectedamongfortypairstOamplifyfor53varietiesandpreliminari
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