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文檔簡介
1、SH系蘋果砧木是國光(Malus domestica var.Rail)和河南海棠(Malus Honanensis Rehder)雜交后代,在抗逆性(抗旱、抗抽條)、矮性、豐產(chǎn)性、果實品質(zhì)、風(fēng)味、著色等諸多性狀方面有優(yōu)良表現(xiàn),為適應(yīng)中國自然條件的蘋果矮化砧木。以往報道中,對SH系砧木主要側(cè)重于從形態(tài)、解剖和生理上研究其矮化效果和生產(chǎn)性能,而在DNA分子水平上有關(guān)SH系不同類型間特性研究,國內(nèi)外尚未見報道。AFLP(擴增片段長度多態(tài)性)
2、是一種新的DNA分子標(biāo)記技術(shù),具有較高的多態(tài)性、較好的穩(wěn)定性和較好的個體差異,近年來AFLP技術(shù)越來越多的用于果樹資源的研究。本試驗選取7種蘋果SH系砧木及其父、母本,利用AFLP分子標(biāo)記建立了其DNA指紋圖譜,并進行了聚類分析,為蘋果優(yōu)良砧木資源的進一步收集、利用和保存提供科學(xué)依據(jù)。 主要研究結(jié)果如下: 1.適于AFLP分析的SH系砧木葉片基因組DNA提取方法為改良CTAB法,在2%CTAB提取液中加入1%β-巰基乙醇
3、、2%PVP40及2%Na2S205,3M醋酸鈉和冰凍無水乙醇同時沉淀DNA,氯仿/異戊醇(24:1,v/v)抽提,可得到適于AFLP反應(yīng)的純度較高,質(zhì)量較好的DNA。 2.建立了適合蘋果葉片分析的AFLP銀染技術(shù)體系:在20μL酶切體系中,包括純化后的基因組DNA450ng,EcoRI 3.0U,Mse13.OU,NEB Buffer2 2.0μL,BSA(10mg/mL)0.2μL,37℃酶切5h;加入接頭后,37℃連接10
4、h(或過夜);連接產(chǎn)物稀釋10倍進行預(yù)擴增;預(yù)擴產(chǎn)物稀釋10倍進行選擇性擴增;加入10μL Loading Buffer變性后,選擴產(chǎn)物在6%變性聚丙烯酰胺凝膠上進行電泳和銀染程序。 3.從130對引物組合中選出20對譜帶較清晰、多態(tài)性較高的引物組合,對9份供試樣品進行擴增分析,共擴增出548條電泳譜帶,其中261條為多態(tài)性帶,多態(tài)性比率為47%,根據(jù)材料間的特征帶和差異帶,從而獲得國光和河南海棠及其雜交后代SH系基因組DNA指
5、紋圖譜。 4.依據(jù)簡單匹配系數(shù)對AFLP擴增結(jié)果進行UPGMA聚類,獲得聚類樹狀圖。結(jié)果表明,砧木間相似系數(shù)介于0.47~0.76,在相似系數(shù)0.58的水平上將7種砧木分為2個類群,4個小組,雜交種SH系砧木存在一定的遺傳多樣性。 5.在相似系數(shù)0.55的水平上,SH系砧木與父本河南海棠,母本國光分為3個大的類群。SH系砧木自成一個聚類群,聚類圖上SH系砧木位置靠近父本,田問觀察SH系多數(shù)葉片有較深的缺刻,葉片易出現(xiàn)黃化
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