非動物源性培養(yǎng)條件下臍帶間充質(zhì)干細胞轉(zhuǎn)分化為汗腺樣細胞的生物學特性研究.pdf

1、大面積深度燒、創(chuàng)傷會造成皮膚的正常結(jié)構(gòu)和功能嚴重受損,其中皮膚附屬器如汗腺等結(jié)構(gòu)的破壞及功能喪失將嚴重影響燒、創(chuàng)傷患者的生存質(zhì)量。目前已有研究證明間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells,MSCs)能有效參與促進皮膚與汗腺損傷的修復與再生,有望促進燒、創(chuàng)傷后患者的修復效果并改善其生存質(zhì)量。MSCs是一類具有自我更新和多向分化潛能的細胞,目前在研究和臨床上的應用也越來越廣泛。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),骨髓來源的MSCs(Bonem

2、arrowderived-MSCs,BMMSCs)在特定的誘導環(huán)境下能夠成功地向汗腺樣細胞分化并修復受損的汗腺組織。然而,受到細胞培養(yǎng)周期的限制,無法在燒、創(chuàng)傷治療的早期得以應用,同時BMMSCs的獲取須行骨髓穿刺術(shù),給供者造成一定痛苦,且BMMSCs的增殖及分化潛能隨供者年齡的增大而下降。因此,尋找新的MSCs來源是目前國內(nèi)外干細胞研究的熱點。
　　臍帶作為MSCs的一種可靠來源,較骨髓容易獲得,具有操作簡便,來源豐富,分化能力

3、強,對供者無傷害,移植物抗宿主病(GVHD)發(fā)生率低,干細胞所占比例大以及避免倫理爭議等諸多優(yōu)點,更有望應用于臨床治療。目前其多向分化潛能已得到證實,因此臍帶來源間充質(zhì)干細胞(umbilicalcordderived-MSCs,UCMSCs)可以作為一種嶄新的細胞治療策略應用于燒傷后汗腺損傷修復再生研究。我們在前期研究中已初步發(fā)現(xiàn)UCMSCs在特定的誘導環(huán)境下具有向汗腺樣細胞分化的潛能。然而,因培養(yǎng)條件以及血清使用、添加細胞因子種類等不

4、同,造成不同批次的細胞表型、增殖能力、長期培養(yǎng)后的細胞功能以及向汗腺細胞的分化能力等存在較大差異,直接影響了UCMSCs在汗腺再生研究中的應用。因此亟待建立一種符合臨床使用的非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)和鑒定方法以及向汗腺細胞分化的標準化體系,為開展進一步的基礎研究和深入的臨床前實驗研究奠定實驗基礎。
　　本研究分為以下兩部分:1.首先,建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs分離、培養(yǎng)與鑒定體系,采用流式細胞術(shù)檢測細胞

5、的表面抗原的表達、分析細胞的增殖活性。2.建立非動物源性培養(yǎng)條件下UCMSCs向汗腺細胞分化體系,采用流式細胞術(shù)、RT-PCR、western-blot以及染色體核型分析等鑒定分化后汗腺樣細胞的標志物以及臨床前應用的安全性。實驗結(jié)果顯示,UCMSCs在無動物血清的安全培養(yǎng)條件下依然能保持MSCs特有的生物學表型和增殖能力,且各組間無明顯差異;經(jīng)無動物血清汗腺分化培養(yǎng)基的誘導下,UCMSCs可以成功地向汗腺樣細胞分化,誘導后細胞的汗腺標記