安徽地區(qū)漢族家族性肥厚型心肌病MYH7基因突變研究.pdf

1、背景：家族性肥厚型心肌病(familial hypertrophic cardiomyopathy，F(xiàn)HC)是一種心肌肌小節(jié)基因相關(guān)疾病，單一責(zé)任基因突變即可致病?；颊呖稍跓o明顯誘因下出現(xiàn)心室肥厚、黑朦、暈厥、心絞痛、心功能不全和猝死。發(fā)病人群中家族性發(fā)病者約為55％，符合常染色體顯性遺傳規(guī)律，近年來國內(nèi)外針對(duì)FHC的臨床和基礎(chǔ)研究已步入分子生物學(xué)水平，已發(fā)現(xiàn)FHC有至少15種致病責(zé)任基因，其中β肌球蛋白重鏈(MYH7)是肌小節(jié)的主要成

2、分之一，30％-50％的FHC是由MYH7基因突變所致。而目前有關(guān)安徽地區(qū)FHC的基因分布和基因突變數(shù)據(jù)庫尚未見系統(tǒng)研究。目的：目前針對(duì)安徽地區(qū)FHC致病基因分布、基因型等研究報(bào)告較少。我們選擇MYH7基因?yàn)楹蜻x基因，對(duì)安徽漢族FHC家系MYH7基因進(jìn)行測序研究和分析，研究安徽地區(qū)FHC的致病基因突變位點(diǎn)和分布，并結(jié)合其臨床表現(xiàn)，探索MYH7基因型與表現(xiàn)型之間的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上建立臨床前期診斷的新方法、新技術(shù)，做到早期預(yù)防，以期在臨床癥

3、狀出現(xiàn)前即作出患病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測及預(yù)后估計(jì)。 方法：收集3個(gè)無血緣關(guān)系的漢族家族性肥厚型心肌病的家系(成員共計(jì)37人)，均來自安徽地區(qū)，3例先證者均為男性，年齡42-51歲。每例患者其家族中至少兩人發(fā)病。對(duì)照組為5例健康志愿者(均為安徽漢族，男3例，女2例， 42-66歲，各項(xiàng)檢查均未見異常)。用碘化鉀法常規(guī)提取外周靜脈血白細(xì)胞DNA，于-20℃保存。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道設(shè)計(jì)MYH7基因3-26號(hào)外顯子含側(cè)翼內(nèi)含子序列的引物。聚合酶鏈反應(yīng)(

4、PCR)擴(kuò)增3例家族性肥厚型心肌病先證者基因組DNA，將所擴(kuò)增的外顯子的PCR產(chǎn)物均按雙脫氧末端終止法進(jìn)行測序反應(yīng)，應(yīng)用具有突變位點(diǎn)的目的片段的擴(kuò)增引物序列，擴(kuò)增突變先證者家系中其他成員和5例正常人的的DNA目的片段(無論是否診斷為HCM)，PCR產(chǎn)物按雙脫氧末端終止法進(jìn)行測序反應(yīng)。運(yùn)用chromas程序及Nucleic Acids Research提供的正常人MYH7基因外顯子標(biāo)準(zhǔn)序列(genebank)來分析、對(duì)照測序結(jié)果，檢測確定

5、突變位點(diǎn)。 結(jié)果：在3個(gè)FHC家系先證者中，發(fā)現(xiàn)一先證者M(jìn)YH7基因發(fā)生移碼突變，其18外顯子nt2013(基因組12624位)C缺失、nt2025(基因組12636位)C插入，從而導(dǎo)致其第671位氨基酸發(fā)生同義突變即精氨酸(CGC)一精氨酸(CGT)，其后續(xù)氨基酸均發(fā)生編碼錯(cuò)誤，表達(dá)異常蛋白。隨后對(duì)其家系進(jìn)行突變篩選，結(jié)果在其先證者家系中又發(fā)現(xiàn)2例攜帶該突變，其中1人發(fā)病。正常對(duì)照組則未發(fā)現(xiàn)此突變。 結(jié)論：首次在我國

6、漢族人中發(fā)現(xiàn)MYH7基因18號(hào)外顯子nt2013C缺失、nt2025C插入移碼突變，此突變?cè)谠摷蚁当憩F(xiàn)為終生外顯率較高，發(fā)病較晚，多數(shù)中年以下者病情相對(duì)較輕，無暈厥史，有的年青人尚可無癥狀。在3個(gè)FHC研究中，發(fā)現(xiàn)1個(gè)家系為MYH7基因基因的突變，另外2個(gè)家系未發(fā)現(xiàn)同樣突變，反應(yīng)了HCM的遺傳異質(zhì)性。具有相同突變的家系成員可有不同表型，臨床表型差異較大，提示可能有一些環(huán)境因素、修飾基因因素等參與了FHC的發(fā)生與發(fā)展過程，這些因素可能是造