S1PR5在NK細(xì)胞介導(dǎo)移植物抗宿主病中的作用及其機(jī)制.pdf

1、研究背景:異基因造血干細(xì)胞移植(allo-HSCT)技術(shù)已經(jīng)成為治療血液系統(tǒng)疾病和某些實(shí)體腫瘤的重要方法之一。急性移植物抗宿主病（aGVHD）仍是影響移植成功率的重要因素。NK細(xì)胞是allo-HSCT后最早恢復(fù)免疫重建的細(xì)胞，目前的研究已經(jīng)證實(shí)NK細(xì)胞可以抑制aGVHD的發(fā)生但不影響移植物抗腫瘤作用。鞘氨醇-1-磷酸受體5（S1PR5）是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的表達(dá)于NK細(xì)胞表面的一種G蛋白耦聯(lián)受體，能夠介導(dǎo)NK細(xì)胞由骨髓和淋巴結(jié)向其他組織的遷移，

2、進(jìn)而發(fā)揮免疫學(xué)功能。前期的臨床研究發(fā)現(xiàn)allo-HSCT患者中S1PR5表達(dá)水平與aGVHD的發(fā)生率密切相關(guān)。
　　研究目的:主要通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)探討S1PR5對(duì)aGVHD的影響及相關(guān)作用機(jī)制。
　　研究方法及結(jié)果:
　　①應(yīng)用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeat andcas9 protein)技術(shù)構(gòu)建S1PR5基因敲除(

3、S1PR5-/-)的小鼠;通過(guò)qPCR技術(shù)及蛋白免疫印跡雜交技術(shù)分別在RNA水平及蛋白水平上成功驗(yàn)證了S1PR5-/-純合子小鼠中S1PR5被敲除。
　　②流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)S1PR5-/-和WT C57BL/6小鼠體內(nèi)骨髓、脾臟、淋巴結(jié)及外周血中淋巴細(xì)胞亞群分布，結(jié)果發(fā)現(xiàn)S1PR5-/-小鼠體內(nèi)，骨髓、淋巴結(jié)中NK細(xì)胞比例較WT小鼠明顯增高，但是脾臟、外周血中NK細(xì)胞比例較WT小鼠明顯降低。
　　③分別將供者WT（對(duì)照組）

4、或者S1PR5-/-（實(shí)驗(yàn)組）C57BL/6小鼠移植物（脾細(xì)胞+骨髓細(xì)胞）經(jīng)尾靜脈注射入致死劑量照射后的受者BALB/c小鼠體內(nèi)，建立aGVHD模型，隨訪小鼠體重、aGVHD評(píng)分及生存時(shí)間。移植后觀察60天，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠較對(duì)照組小鼠生存率明顯降低; aGVHD評(píng)分明顯升高;兩組體重減輕變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　④移植后第4天分別取受者小鼠的骨髓、脾臟、淋巴結(jié)及外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同部位淋巴細(xì)胞亞群分布。移植后第4天，實(shí)驗(yàn)

5、組小鼠骨髓中NK細(xì)胞含量明顯高于對(duì)照組;而在脾臟、淋巴結(jié)及外周血中，兩組間的NK細(xì)胞含量沒(méi)有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓T細(xì)胞含量明顯低于對(duì)照組小鼠中T細(xì)胞量;在脾臟、淋巴結(jié)及外周血中，兩組間T細(xì)胞含量均沒(méi)有明顯差異。
　?、菀浦埠蟮?0天分別取出受者小鼠的骨髓、脾臟、淋巴結(jié)及外周血，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同組織中淋巴細(xì)胞亞群分布。實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓中NK細(xì)胞含量明顯高于對(duì)照組骨髓中NK細(xì)胞含量;在脾臟、淋巴結(jié)及外周血中，兩組NK細(xì)胞含量沒(méi)

6、有明顯差異。實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血中T細(xì)胞含量明顯高于對(duì)照組外周血中T細(xì)胞含量;在骨髓、脾臟及淋巴結(jié)中，兩組間T細(xì)胞含量沒(méi)有明顯差異。
　　研究結(jié)論:
　　①CRISPR/Cas9技術(shù)是建立基因敲除小鼠模型有效而快捷的方法之一;
　?、赟1PR5影響NK細(xì)胞的在小鼠體內(nèi)的分布;
　　③供者小鼠中S1PR5表達(dá)缺失能夠加重受者小鼠的aGVHD;
　?、?S1PR5表達(dá)缺失致使NK細(xì)胞由骨髓遷出受阻，外周循環(huán)中對(duì)aG