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文檔簡介
1、山東大學博士學位論文胰腺腫瘤分子生物學的相關(guān)性研究姓名：李勝申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：李占元20030315論文一CO自殺基因和免疫因子基因(IL18、GhICSF)重組表達的研究研究生李勝導師李占元教授中文摘要目的：利用基因重組技術(shù)構(gòu)建人IL一18(rhlL18)的真核表達載體pORF5一hlL～18、pVITR02一IL一18、pVITR02CD—IL一18及pVITR02一CDGM—CSF，并在大腸桿菌中表達，以檢測
2、其生物學作用以及特點，初步探討其對腫瘤防治的作用。方法：從外周血細胞提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到IL18的eDNA，利用分子克隆的方法依次構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pORF5hlL一18、pVITR02一IL一18、pVITR02一CD、pVITR02CD—IL一18及pVITR02cD書McsF：利用IPTG誘導成功轉(zhuǎn)染pORF5一hIL—18質(zhì)粒的大腸桿菌JMl09表達rhlL一18；利用SDSPAGE法鑒定，同時利用NiS04飽和的HisBin
3、dResin純化rhIL一18的蛋白產(chǎn)物；采用ELISA測定rhll，一18以及rhlL一2對正常人外周血單核細胞(PBMc)表達粒一巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)的刺激作用：利用共培養(yǎng)方法檢測rhlL18及對NI(細胞細胞毒活性的影響。結(jié)果：真核表達質(zhì)粒pORF5hlL一18、pVITR02IL—18、pVITR02一CD、pVITR02一CD—IL—18及pVITR02_cD—黼一csF構(gòu)建成功；真核表達質(zhì)粒pORF5hlL18
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