骨髓源性側(cè)群細(xì)胞的體外增殖及其向肝樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　1.通過觀察BMSP在體外培養(yǎng)條件下能否保持側(cè)群細(xì)胞的特性,以探討B(tài)MSP在體外擴(kuò)增的可能性。
　　2.觀察在HGF定向誘導(dǎo)下大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化的情況,初步探討HGF在大鼠BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞中發(fā)揮的作用及機(jī)制。
　　方法:
　　1.從大鼠的股骨和脛腓骨分離骨髓細(xì)胞并制備骨髓細(xì)胞懸液,通過流式細(xì)胞儀分選獲取BMSP;用低糖DMEM﹢10％胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)BMSP。采用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中ABC

2、G-2基因表達(dá)水平。
　　2.在體外向BMSP中加入不同濃度的HGF誘導(dǎo)其向肝樣細(xì)胞分化,并分別于第3、7、14、21天,通過RT-PCR、免疫印跡法等技術(shù)檢測(cè)AFP、ALB等細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　1.每只SD大鼠的雙側(cè)股骨和脛腓骨所制備的骨髓細(xì)胞懸液的細(xì)胞總數(shù)約2-10×108個(gè),經(jīng)分選可獲得5-10×105個(gè)BMSP。
　　2.BMSP在體外培養(yǎng)6小時(shí)后開始貼壁生長(zhǎng),細(xì)胞形態(tài)以長(zhǎng)梭形為主

3、。隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),細(xì)胞生長(zhǎng)曲線顯示第7天細(xì)胞數(shù)量最多,以后進(jìn)入平臺(tái)期。第7天細(xì)胞按1:2傳代培養(yǎng),傳代后細(xì)胞于24小時(shí)內(nèi)完全貼壁,細(xì)胞傳至第10代時(shí),細(xì)胞增殖能力仍然很強(qiáng)。
　　3.誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)表明:一定濃度的HGF具有明顯的促進(jìn)BMSP轉(zhuǎn)分化為肝樣細(xì)胞。RT-PCR檢測(cè)顯示:培養(yǎng)第3天的BMSP空白組及因子組未見AFP、ALB mRNA表達(dá);AFP mRNA在第7天的因子組表達(dá)、ALB mRNA在因子組則不表達(dá),空白組AFP

4、、ALB mRNA均未表達(dá);AFP mRNA在第14天的因子組表達(dá)減弱、ALB mRNA在第14天的因子組表達(dá),空白組AFP、ALB mRNA均未表達(dá);第21天因子組見AFP mRNA不表達(dá)、ALB mRNA表達(dá)減弱,空白組AFP、ALB mRNA均未表達(dá)。因子組與對(duì)照組相比有顯著性差異,P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.通過流式細(xì)胞儀分選獲得BMSP在一定時(shí)間內(nèi)可以在體外擴(kuò)增并保持干細(xì)胞的特性,且傳代的BM