肝病相關(guān)血清蛋白質(zhì)分子標(biāo)記物研究和新型穩(wěn)定同位素標(biāo)記物在定量蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用評(píng)價(jià).pdf

1、y99S：O分類號(hào)——UDC密級(jí)——編號(hào)一復(fù)旦大學(xué)博士后研究工作報(bào)告肝病相關(guān)血清蛋白質(zhì)分子標(biāo)記物研究和新型穩(wěn)定同位索標(biāo)記物在定量蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用評(píng)價(jià)導(dǎo)師I作完成閂期康曉桶創(chuàng)堪韭世墊盟皇蔓一Ⅱ=墊豎立』蛆報(bào)告提交日期2Q業(yè)生iIU復(fù)且大學(xué)2005年11J1二、穩(wěn)定同位素標(biāo)記結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)差異定量差異分析復(fù)雜蛋白質(zhì)樣本是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。2甲氧基4，5二氫1氫咪唑(2一methoxy4，5一dihydroIHimidazole，輕

2、型標(biāo)記物，DO)可以與賴氨酸殘基上的e氨基發(fā)生特異反應(yīng)，從而增強(qiáng)肽段的電離性能，增加肽段在表面增強(qiáng)激光電離(MALDI)型質(zhì)譜的序列覆蓋性。我們合成2甲氧基一4，5二氘1氫咪唑(重型標(biāo)記物，D4)與DO一起分別標(biāo)記不同濃度的牛血清白蛋白，并將D0BSA以及D4BSA按一定比例混合(從10：I到l：5共8組)，用MALDI和電噴霧電離(ESI)型質(zhì)譜對(duì)混合物進(jìn)行定量與鑒定。結(jié)果顯示，1標(biāo)記反應(yīng)特異，反應(yīng)物不和N端氨基反應(yīng)，只和e氨基發(fā)生反

3、應(yīng)：2定量結(jié)果與預(yù)計(jì)值完全符合，其中MALDI和ESI的定量結(jié)果一致：3在尿素溶液進(jìn)行標(biāo)記反應(yīng)對(duì)定量結(jié)果沒有影響，適合用于常規(guī)蛋白質(zhì)組樣品分析；4重型標(biāo)記物對(duì)肽的色譜分離行為沒有影響，可以和2維液相色譜分離技術(shù)聯(lián)合使用(鳥槍法，shotgun)；5標(biāo)記后的肽二次電離以Y離子為主，有利于譜圖的解析以及deHOVO測(cè)序。結(jié)論，2methoxy4，5一dihydro一1H—imidazole以及其134型可以用于定量差異蛋白質(zhì)組研究，在HCC