尼莫地平及馬來(lái)酸桂哌齊特對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)性腦血管痙攣療效的比較研究.pdf

1、目的：
　　蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）是臨床上較為常見(jiàn)的腦血管疾病之一，約占所有腦卒中的5-7％，有較高的致殘率和死亡率。蛛網(wǎng)膜下腔出血，約80%見(jiàn)于顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的破裂出血，還有動(dòng)靜脈血管畸形破裂出血、血管病變、靜脈血栓形成等，也有少部分患者找不到出血原因。遲發(fā)性腦血管痙攣（delayed cerebral vasospasm，DCVS）是蛛網(wǎng)膜下腔出血后最常見(jiàn)、最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，發(fā)生

2、率高達(dá)30~90%，引起嚴(yán)重局部腦組織缺血或遲發(fā)性缺血性腦損害，是造成SAH病人致死和致殘重要原因。因此，積極防治遲發(fā)性腦血管痙攣，是影響蛛網(wǎng)膜下腔出血患者預(yù)后的關(guān)鍵。
　　尼莫地平是目前臨床上用于治療DCVS應(yīng)用最廣泛的的二氫吡啶類鈣通道拮抗劑（calcium channel blocker，CCB），通過(guò)抑制Ca2+內(nèi)流，加強(qiáng)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取Ca2+能力，達(dá)到抑制血管平滑肌收縮，起解痙作用，眾多研究都以尼莫地平作為治療療效的

3、比較組。馬來(lái)酸桂哌齊特（cinepazidemaleate，CM），是一種新型鈣通道阻滯劑，與尼莫地平一樣，作用于L型鈣離子通道1?亞單位，但是結(jié)合位點(diǎn)不同，可以通過(guò)抑制腺苷的降解，降低氧耗，阻止Ca2+跨膜進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)，使血管平滑肌松弛，而導(dǎo)致腦血管擴(kuò)張，從而緩解血管痙攣、降低血管阻力、增加血流量，改善腦代謝，還能夠抑制血管炎性反應(yīng)。其在改善心腦血管疾病、糖尿病引起的微循環(huán)障礙、顱腦損傷后腦血管痙攣的療效均已得到證實(shí)，但目前尚

4、無(wú)對(duì)比尼莫地平與馬來(lái)酸桂哌齊特治療SAH后DCVS的確切報(bào)道。
　　因此，本實(shí)驗(yàn)采用“枕大池二次注血法”建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后DCVS動(dòng)物模型，并給予尼莫地平、馬來(lái)酸桂哌齊特靜脈治療3d、7d后，分別使用Zea-Longa評(píng)分法觀察大鼠的神經(jīng)功能癥狀、TCD檢測(cè)基底動(dòng)脈最大血流速度（VmBA）、基底動(dòng)脈管壁平滑肌厚度及其形態(tài)學(xué)變化，從多方面比較馬來(lái)酸桂哌齊特與尼莫地平對(duì)遲發(fā)性腦血管痙攣的療效，為臨床治療策略提供參考。
　　

5、材料和方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)材料
　　成年SPF級(jí)SD大鼠64只，雌雄隨機(jī)，每只體重250±50g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，于廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房普通飼料喂養(yǎng)1-2周后，行“枕大池二次注血法”建立蛛網(wǎng)膜下腔出血?jiǎng)游锬Ｐ汀?dòng)物所有操作均符合廣州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理學(xué)委員會(huì)及動(dòng)物管理?xiàng)l例。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組
　　隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組、DCVS組、尼莫地平組和馬來(lái)酸桂哌齊特組，每組又根據(jù)時(shí)間不同隨機(jī)

6、分為3d組和7d組，每組8只。所有大鼠均采用3.6%水合氯醛（1ml/100g）腹腔內(nèi)注射麻醉，對(duì)照組大鼠采用模擬“枕大池二次注血法”，注射生理鹽水（約0.25ml）進(jìn)入蛛網(wǎng)膜下腔建立動(dòng)物模型，其余各組大鼠均采用“枕大池二次注血法”，在蛛網(wǎng)膜下腔注入自體動(dòng)脈血約0.25ml,建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血?jiǎng)游锬Ｐ汀Ｔ炷３晒?，?duì)照組大鼠不予特殊處理，自由飲水飲食；造模后30min，DCVS組大鼠，尾靜脈注入生理鹽水0.5ml每天，自由飲水飲食；

7、造模后30min，馬來(lái)酸桂哌齊特組大鼠，給予17.5mg/kg馬來(lái)酸桂哌齊特溶于0.5ml生理鹽水，尾靜脈注入，每日一次，自由飲水飲食；造模后30min，尼莫地平組大鼠，0.5mg/kg尼莫地平注射液溶于0.5ml生理鹽水，尾靜脈注入，每日一次，自由飲水飲食。各組動(dòng)物模型建立成功后，按照Z(yǔ)ea-Longa評(píng)分法觀察造模后3d、7d大鼠神經(jīng)癥狀變化情況。分別在造模后3d、7d，對(duì)各組大鼠進(jìn)行經(jīng)顱多普勒超聲（TCD）檢測(cè)基底動(dòng)脈最大血流速度

8、（VmBA）,從而判定大鼠腦血管的痙攣情況。在造模后3d、7d，分別取得各組大鼠基底動(dòng)脈，其下2/3給予固定、染色后，制作石蠟切片，在光鏡下觀察其基底動(dòng)脈管壁形態(tài)學(xué)變化及并測(cè)量平滑肌厚度。在造模后3d、7d同時(shí)，將取得各組大鼠基底動(dòng)脈的上1/3，予固定、染色后，制作石蠟切片，在透射電鏡JEM-2010下觀察其基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)膜彈力層的變化情況。VmBA以X±S表示，多組定量數(shù)據(jù)間的比較采用單因素方差分析，兩組間的兩兩比較采用Bonf

9、erroni檢驗(yàn)，設(shè)定當(dāng)P＜0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠的一般情況及標(biāo)本的觀察
　　造模成功后，DCVS組大鼠死亡2只，馬來(lái)酸桂哌齊特組死亡2只，尼莫地平組死亡1只，總死亡率約7.8%。大鼠處死、開(kāi)顱后，DCVS組、馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組可見(jiàn)大鼠腦干背側(cè)蛛網(wǎng)膜下腔明顯的凝血塊，基底動(dòng)脈腹側(cè)周圍也可發(fā)現(xiàn)凝血塊；隨時(shí)間的推移，第7d凝血塊的范圍、大小與第3d相比明顯減退,對(duì)照組均未出現(xiàn)類似改

10、變。
　　2.神經(jīng)功能癥狀變化
　　造模后當(dāng)天，注血大鼠均出現(xiàn)精神萎靡、食欲下降、呼吸急促、運(yùn)動(dòng)遲緩、毛發(fā)凌亂等，以術(shù)后2d~4d最為明顯。其中有24只大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙，如斜頸、后肢或四肢癱瘓、轉(zhuǎn)圈運(yùn)動(dòng)等。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模后神經(jīng)癥狀評(píng)分顯示，3d時(shí)DCVS組、馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組分別有（11/14）、（5/14）、（6/15）只大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙；7d時(shí)DCVS組仍有（3/7）只大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙

11、，馬來(lái)酸桂哌齊特組與莫地平組大鼠神經(jīng)功能障礙基本恢復(fù)正常。
　　3.經(jīng)顱多普勒超聲（TCD）檢測(cè)大鼠基底動(dòng)脈最大血流速度（VmBA）
　　對(duì)照組大鼠在造模后3d、7d時(shí)基底動(dòng)脈多普勒超聲結(jié)果顯示：基底動(dòng)脈血流速度無(wú)明顯差異，血流速度良好，未見(jiàn)明顯加快。與對(duì)照組比，造模后3d時(shí)DCVS組大鼠基底動(dòng)脈多普勒超聲結(jié)果顯示：基底動(dòng)脈血流速度明顯加快，腦組織血供明顯減少，腦血管痙攣嚴(yán)重；馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組顯示基底動(dòng)脈血流速度

12、較前有不同程度加快，但血流速度較DCVS組慢，也出現(xiàn)腦血管痙攣情況；馬來(lái)酸桂哌齊特組與尼莫地平組大鼠的血流速度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后7d時(shí)DCVS組基底動(dòng)脈痙攣情況有緩解，馬來(lái)酸桂哌齊特組大鼠基底動(dòng)脈血流速度基本恢復(fù)，腦血管痙攣情況明顯好轉(zhuǎn)；尼莫地平組未見(jiàn)明顯異常。計(jì)算大鼠基底動(dòng)脈最大血流速度結(jié)果顯示：DCVS組、馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組在造模后3d時(shí)基底動(dòng)脈血流速度較對(duì)照組顯著加快（P＜0.05），出現(xiàn)腦血管痙攣；D

13、CVS組、馬來(lái)酸桂哌齊特組基底動(dòng)脈血流速度較對(duì)照組造模后7d仍有加快（P＜0.05），且結(jié)果存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而尼莫地平組7d組較對(duì)照組造模后7d并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組造模后3d、7d時(shí)大鼠基底動(dòng)脈血流速度較DCVS組顯著減慢（P＜0.05），造模后7d時(shí)基底動(dòng)脈血流速度較馬來(lái)酸桂哌齊特組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.光鏡觀察基底動(dòng)脈管壁形態(tài)學(xué)與平滑肌厚度變化
　　基底動(dòng)脈常規(guī)

14、病理切片HE染色顯示：對(duì)照組在造模后3d、7d時(shí)基底動(dòng)脈管壁內(nèi)皮完整，結(jié)構(gòu)層次清晰，外層結(jié)締組織分布均勻，無(wú)炎性細(xì)胞。同對(duì)照組比較，造模后3d時(shí)DCVS組7只、馬來(lái)酸桂哌齊特組5只、尼莫地平組4只動(dòng)物分別出現(xiàn)動(dòng)脈痙攣明顯，內(nèi)皮皺褶明顯，平滑肌層增厚明顯，管壁厚度厚薄不均；造模后7d時(shí)DCVS組5只、馬來(lái)酸桂哌齊特組2只、尼莫地平1只分別出現(xiàn)動(dòng)脈痙攣緩解，內(nèi)皮皺褶減少，平滑肌層繼續(xù)增厚?；讋?dòng)脈平滑肌厚度變化：測(cè)量平滑肌厚度顯示DCVS組

15、、馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組造模后3d時(shí)基底動(dòng)脈平滑肌厚度較對(duì)照組造模后3d組顯著增厚（P＜0.05）；DCVS組、馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組造模后7d時(shí)基底動(dòng)脈平滑肌厚度較對(duì)照組造模后7d組增厚（P＜0.05）；馬來(lái)酸桂哌齊特組、尼莫地平組造模后3d、7d時(shí)基底動(dòng)脈平滑肌厚度，較DCVS組造模后3d、7d顯著為低（P＜0.05）；尼莫地平組造模后3d基底動(dòng)脈平滑肌厚度與馬來(lái)酸桂哌齊特組并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），造模后7d時(shí)基

16、底動(dòng)脈平滑肌厚度較馬來(lái)酸桂哌齊特組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。馬來(lái)酸桂哌齊特組與尼莫地平組造模后3d、7d出現(xiàn)動(dòng)脈平滑肌增生程度均低于DCVS組；造模后3d時(shí)馬來(lái)酸桂哌齊特組動(dòng)脈平滑肌增生程度與尼莫地平組相似，造模后7d時(shí)馬來(lái)酸桂哌齊特組高于尼莫地平組。
　　5.透射電鏡觀察基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞和內(nèi)膜彈力層變化
　　基底動(dòng)脈透射電鏡顯示，對(duì)照組在造模后3d、7d管壁內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接，內(nèi)膜彈力層完整。同對(duì)照組比較，造模后3d