不同齲敏感兒童牙菌斑相關(guān)致齲微生物的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)及群落分析.pdf

1、目的:
　　齲病是人類最常見的一種慢性感染性疾病，低齡兒童齲是兒童齲病中的重要組成部分，在兒童生長(zhǎng)發(fā)育中影響深遠(yuǎn)，變形鏈球菌屬（變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌）是最重要的致齲因子。牙菌斑中的致齲微生物在齲病中進(jìn)展及群落結(jié)構(gòu)變化尚不十分明確，本研究第一部分實(shí)驗(yàn)通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)基線及一年后的四種主要致齲菌（變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、嗜酸乳桿菌、內(nèi)氏放線菌）進(jìn)行定量檢測(cè)，監(jiān)測(cè)無(wú)齲兒童（caries free，CF）、低齡兒童齲組(earl

2、y childhood caries，ECC)和重度低齡兒童齲組(severe early childhood caries，S-ECC)兒童牙菌斑中相關(guān)致齲菌的動(dòng)態(tài)變化。在微生物水平上對(duì)兒童齲的預(yù)防和治療提供相關(guān)依據(jù)。第二部分研究則是利用Illumina MiSeq測(cè)序方法鑒定與低齡兒童齲及重度低齡兒童齲相關(guān)的菌群，并對(duì)兩種齲敏感兒童中的富集的菌群做群落分析，由此為齲病防治提供生物干預(yù)措施。
　　方法:
　　1.2012年

3、在德州市某幼兒園隨機(jī)抽選60名3歲兒童，對(duì)其進(jìn)行齲病檢查和牙菌斑樣本收集，1年后對(duì)同一批兒童再次進(jìn)行齲病檢查和牙菌斑樣本采集。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)兩次樣本中的4種主要致齲菌（變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、嗜酸乳桿菌和內(nèi)氏放線菌）進(jìn)行定量檢測(cè)，并計(jì)算各致齲菌的比例。采用SPSS17.0軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　2.利用Illumina MiSeq測(cè)序方法，針對(duì)16SrRNA基因V4變異區(qū)設(shè)計(jì)通用引物進(jìn)行測(cè)序分析，隨機(jī)抽取

4、第一部分實(shí)驗(yàn)中的納入研究的7名ECC兒童和8名S-ECC兒童。并分析菌群微生物在齲病發(fā)生過(guò)程中的群落變化。
　　結(jié)果:
　　1.在基線及1年后患齲率分別為66.7％和81.7％，差異無(wú)意義(x2=1.76，P＞0.01);dmfs分別為(5.80±2.53)和（7.90±1.76），差異有顯著意義(t=3.51，P＜0.01)。ECC、S-ECC組中4種致齲菌所占的比例在基線和1年后有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。1年后ECC

5、、S-ECC組中變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌之和所占的比例顯著高于基線水平(P＜0.01)。
　　2.利用Illumina MiSeq測(cè)序方法總計(jì)得到條1856169序列，經(jīng)過(guò)預(yù)處理統(tǒng)計(jì)和質(zhì)控得到的有效序列為1669057條，平均為57554。經(jīng)鑒定有27種菌門和525種菌屬。菌群微生物主要有5個(gè)主要優(yōu)勢(shì)菌門:變形菌門(Proteobacteria)，放線菌門(Actinobacteria)，厚壁菌門（Frmicutes），梭桿菌門(F

6、usobacteria)，擬桿菌門(Bacteroidetes)。還發(fā)現(xiàn)有7種優(yōu)勢(shì)屬:Parascardovia，Streptococcus（鏈球菌屬），Leptotrichia（纖毛菌屬），Neisseria（奈瑟菌屬），Prevotella（普氏菌屬），Veillonella（韋榮球菌屬），Corynebacterium（棒狀桿菌屬），這些菌屬與齲病進(jìn)展的相關(guān)。像密螺旋體屬，金氏菌屬，嗜血桿菌屬等菌屬在本研究中含量極低，僅可在某些樣

7、本中檢測(cè)出，這些菌屬的致齲作用需要更進(jìn)一步的研究。
　　結(jié)論:
　　1.兒童牙菌斑中主要致齲菌（變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、嗜酸乳桿菌、內(nèi)氏放線菌）的比例變化與低齡兒童齲、重度低齡兒童齲密切相關(guān)，致齲菌所占總菌的比例越高，兒童齲易感性有明顯的持續(xù)性。
　　2.齲病發(fā)展進(jìn)程中菌群結(jié)構(gòu)存在富集性，Parascardovia，Streptococcus（鏈球菌屬），Leptotrichia（纖毛菌屬），Neisseria（奈瑟菌