西洋參莖葉皂苷組合催化氫化及其產(chǎn)物的研究.pdf

1、西洋參(Panax quinquefolium L)是一種具有特殊醫(yī)療價(jià)值的貴重補(bǔ)益藥物，人參皂苷類成分是西洋參的主要活性成份，近來的研究表明，某些人參皂苷類成分表現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性，能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡等，在腫瘤治療和預(yù)防方面具有很高的藥用價(jià)值。 研究表明，人參皂苷的抗腫瘤活性受母核結(jié)構(gòu)的影響，其強(qiáng)到弱的規(guī)律是：齊墩果酸型>人參二醇型>人參三醇型；對于單糖鏈皂苷，人參皂苷抗腫瘤活性受糖數(shù)量的影響

2、，其強(qiáng)到弱的規(guī)律是：苷元>單糖苷>二糖苷>三糖苷>四糖苷；人參皂苷側(cè)鏈環(huán)化以后，活性明顯降低。 隨著研究的深入，一些問題也隨之出現(xiàn)：根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，人參皂苷在酸性條件下極易發(fā)生水解反應(yīng)，構(gòu)型轉(zhuǎn)化生成環(huán)合產(chǎn)物，很可能影響皂苷類成分的口服生物利用度和療效；此外，在人參總皂苷中抗腫瘤活性較強(qiáng)的成分人參皂苷-Rg3、人參皂苷-Rh2含量較低，僅靠提取分離并不能滿足需要。 本論文以從國產(chǎn)西洋參莖葉中提取的人參皂苷為原料，從以下四方面

3、進(jìn)行了系統(tǒng)的研究：(1)總皂苷組合催化氫化技術(shù)及方法的研究，以總皂苷中結(jié)構(gòu)較復(fù)雜的二醇組代表皂苷人參皂苷．Rbx及三醇組代表皂苷人參皂苷-Re為底物，催化氫化，得到化合物Ⅰ、Ⅱ，產(chǎn)率分別為98.76％，99.79％。通過單體皂苷催化氫化的研究，首次建立了溫和、簡便、易于操作的組合催化氫化方法。并運(yùn)用此方法對總皂苷組合催化氫化，構(gòu)建西洋參莖葉總皂苷組合催化氫化產(chǎn)物的化合物庫(GH)。(2)GH組合酸催化水解的研究，將氫化后的總皂苷在酸性條

4、件下水解，控制水解條件，得到次級苷及苷元的新的化合物庫(PH)；(3)GH，PH分離純化的研究，硅膠柱層析法對GH進(jìn)行分離，以硅膠H為固定相，正丁醇：乙酸乙酯：水(4：1：5)為流動相，分離得到化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。以反相C<,18>柱色譜及離心薄層色譜法對PH進(jìn)行分離，分別以70％乙醇和苯：乙酸乙酯(1：1)為流動相，從水解產(chǎn)物的化合物庫中分離得到化合物Ⅳ和Ⅴ。(4)分離純化后產(chǎn)物的鑒定的研究。在對上述制備的五個(gè)化合物的分析鑒定中，本論文

5、通過薄層色譜(TLC)、高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)、核磁共振法(<'1>H-NMR，<'13>C-NMR，DEPT)、電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)等技術(shù)，結(jié)合化合物的理化性質(zhì)，對化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確證，從Ⅰ到Ⅴ分別為：12β,20-二羥基-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖(1-2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-[B-D-吡喃葡萄糖(1-6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20(S)-達(dá)瑪烷；6β，12β,20-二羥基-6-

6、O-[B-D-吡喃葡萄糖(1-2)-a-L-鼠李糖基]-20-0-[B-D-吡喃葡萄糖基]-20(S)-達(dá)瑪烷，3β，6β，12β-三羥基20-O-[B-D-吡喃葡萄糖基]-20(S)-達(dá)瑪烷，3β,6β,12β-三羥基達(dá)瑪-(E)-20(22)-烯，38,68,12β,20-四羥基-20(R)-達(dá)瑪烷；經(jīng)過文獻(xiàn)檢索，上述化合物在前文獻(xiàn)中均未見報(bào)道，均為首次得到的新化合物。(5)高效液相色譜分析方法的研究，在對組合催化氫化反應(yīng)進(jìn)行分析的

7、過程中，運(yùn)用了HPLC-ELSD技術(shù)，在對組合催化氫化反應(yīng)進(jìn)行分析的過程中，本論文運(yùn)用了HPLC-EISD技術(shù)，采用C<,18>色譜柱(4.6mmid，250mm)，乙腈、水為流動相，梯度洗脫：0～35min，29％～32％B；35～57rain，32％B～40％B；57～80min，40％B。柱溫25℃；流速1.0ml/min；漂移管溫度設(shè)定為60℃；載氣壓力為0.40mPa?？傇碥罩懈鹘M分達(dá)到基線分離。 本論文通過多次實(shí)驗(yàn)，

8、首次建立了總皂苷組合催化氫化方法，為人參皂苷結(jié)構(gòu)修飾研究提供新技術(shù)；構(gòu)建催化氫化產(chǎn)物化合物庫，為人參皂苷類成分生物活性及構(gòu)效關(guān)系的研究提供了物質(zhì)基礎(chǔ)及理論依據(jù)；同時(shí)首次建立了組合催化氫化產(chǎn)物組合酸催化水解法，半合成具有生物活性的人參皂苷和苷元的化合物群；建立總皂苷組合催化氫化產(chǎn)物及組合水解產(chǎn)物的分離方法。建立多步柱層析及薄層層析的分離方法，得到五個(gè)化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ，均為首次得到的新化合物；首次建立HPIC-ELsD對總皂苷的分析