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文檔簡介
1、大足黑山羊是重慶市大足縣境內(nèi)一個具有優(yōu)良遺傳特性的山羊群體。該群體毛色純黑,體型較大,生長發(fā)育快,產(chǎn)肉性能好,產(chǎn)仔率高,每只母羊每年繁殖率在350﹪~400﹪。目前正在對該山羊群體進行品種選育工作,已在當?shù)亟⒘吮7N選育場,組建了核心群,但購入的這些羊只個體間的譜系不清,不利于選育工作的進行。本實驗就是用微衛(wèi)星DNA技術(shù)對核心群中的個體進行親緣關(guān)系分析,為建立合理的選配制度提供參考,防止近親繁殖引起的品種退化,加快品種選育進程。
2、 本實驗用于研究的對象是黑山羊個體的基因組DNA。通過頸靜脈采血共獲得133個個體的血液樣本,其中104只為購入的子代、11只為公羊、18只為被檢子代的母親,母親樣本已知的子代有24只,母親樣本未知的有80只。用苯酚-氯仿法提取基因組DNA,經(jīng)檢測,所提DNA達到本實驗所需要的質(zhì)量要求。 實驗選用的微衛(wèi)星位點通過Internet查詢數(shù)據(jù)庫等方式獲得,并根據(jù)微衛(wèi)星選擇標準進行篩選,合成引物后,設(shè)置溫度梯度,調(diào)整鎂離子濃度等優(yōu)化PC
3、R擴增條件,最后選擇確定了24個微衛(wèi)星位點進行研究分析。本實驗PCR擴增產(chǎn)物用非變性聚丙烯酰胺凝膠檢測并用硝酸銀染色顯跡,通過掃描獲得顯色后的凝膠電泳圖像,用凝膠分析軟件Bandscan根據(jù)與分子量標準pBR322DNA/MspIMarkers比照,讀取片斷大小,建立包括每個個體每個位點等位基因信息的基因型數(shù)據(jù)庫。 使用專用的親子鑒定軟件Cervus2.0,根據(jù)得到的基因型數(shù)據(jù)庫及已知的親緣關(guān)系記錄進行相關(guān)統(tǒng)計量的計算和親權(quán)分析
4、。本實驗中共24個微衛(wèi)星位點,其位點的平均等位基因數(shù)是9.87個(4-14),等位基因最多的是BP28和BMS1248兩個位點,都為14個。等位基因最少的是位點ILSTS028,有4個,也達到了用微衛(wèi)星進行親權(quán)鑒定所要求的個數(shù)。平均期望雜合度為0.837,而平均觀察雜合度為0.928,與實際觀察值有一定差距,其原因可能是該采樣群體受到一定外來因素或近交的影響。平均雜合度較高也表明了該黑山羊群體遺傳變異大,對環(huán)境的適應(yīng)能力強。平均多態(tài)信息
5、含量為0.812,其中PIC值最低的是位點MAF070為0.667,PIC值最高的是BMS1248為0.893,表明本實驗所選擇的24個微衛(wèi)星位點具有豐富的多態(tài)性,可提供較多的多態(tài)信息含量。 母子關(guān)系已知時,計算分析得到的排除概率為0.999976,母子關(guān)系未知時排除概率為0.999995。根據(jù)每個候選父親的LOD值及Delta標準,每個子代都鑒定到最可能父親,但其置信度水平各有差異。以父權(quán)為依據(jù)可將104個后代分成11個群體。
6、根據(jù)分群結(jié)果來看,屬于鐵山鎮(zhèn)公羊后代的平均個數(shù)最多,尤以050051和DT0015的后代為最多,這兩只公羊都是鐵山鎮(zhèn)西北村農(nóng)戶所養(yǎng)大公羊,這與購買子代小羊時農(nóng)戶提供親緣相吻合,同時具有同胞關(guān)系的4號和6號,54號和56號及78號和80號其鑒定結(jié)果也與記錄相同。 綜上可以看出:(1)微衛(wèi)星位點多態(tài)性高,呈共顯性遺傳,且可以用常規(guī)的PCR和電泳技術(shù)進行分析,檢測方便準確,是畜禽繁殖育種中進行家畜親權(quán)鑒定和個體識別的理想方法;(2)黑
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