四川各地黑山羊分子遺傳特征研究.pdf

1、黑山羊主要產(chǎn)于我國(guó)的南方及東南亞，久負(fù)盛譽(yù)。其獨(dú)特之處在于全身黑毛，生長(zhǎng)發(fā)育快，板皮厚滿，皮毛質(zhì)軟細(xì)小，瘦肉率高，含脂量低，肉質(zhì)鮮嫩，味美膻氣少。從目前國(guó)際、國(guó)內(nèi)形勢(shì)看，我國(guó)黑山羊產(chǎn)業(yè)前景看好。據(jù)業(yè)內(nèi)人士分析認(rèn)為，我國(guó)黑山羊市場(chǎng)潛力巨大，出口創(chuàng)匯前景看好。當(dāng)前國(guó)際大氣候的變化為黑山羊產(chǎn)業(yè)發(fā)展帶來(lái)了新的機(jī)遇，由于黑山羊品種不同，其品質(zhì)也就各不相同，故品種的認(rèn)定就自然成為我國(guó)黑山羊產(chǎn)業(yè)急需要解決的問(wèn)題 四川省黑山羊資源比較豐富，過(guò)

2、去的研究多為品種性能測(cè)定與評(píng)價(jià)等方面，對(duì)品種的起源、群體間的遺傳差異、黑山羊的品種分化及相似性研究甚少。特別是利用分子標(biāo)記研究黑山羊大群體的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性，尚未見(jiàn)有報(bào)道。 首先，我們參閱以往牛、山羊和綿羊等RAPD研究的文獻(xiàn)，選取98個(gè)引物，經(jīng)過(guò)反復(fù)篩選，從中挑選出30個(gè)重復(fù)性好的多態(tài)引物，運(yùn)用構(gòu)建總DNA基因池的方法，對(duì)黑山羊、南江黃羊、北川白山羊、成都麻羊4個(gè)山羊品種和藏綿羊進(jìn)行RAPD分析，并重點(diǎn)進(jìn)行了引物篩選和實(shí)驗(yàn)

3、條件的優(yōu)化，建立了適宜山羊RAPD的反應(yīng)體系，計(jì)算了各品種間的遺傳距離指數(shù)，探討了彼此的親緣關(guān)系。驗(yàn)證了實(shí)驗(yàn)方法本身的可靠性。 上面實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們利用16條多態(tài)性好的引物，對(duì)分布于四川省不同區(qū)域的9個(gè)黑山羊種群共540個(gè)個(gè)體逐一進(jìn)行了隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)DNA(RAPD)分析。結(jié)果表明：16條多態(tài)性引物在9個(gè)黑山羊種群中，共擴(kuò)增出170個(gè)能完全重復(fù)且表現(xiàn)多態(tài)性的RAPD標(biāo)記，各標(biāo)記的大小在0.1-2.5kb之間。采用Nei氏標(biāo)準(zhǔn)距離

4、對(duì)不同品種的遺傳關(guān)系進(jìn)行分析，黑山羊群體間的遺傳距離在0.105l一0.2978之間。金堂黑山羊與富順黑山羊之間相似系數(shù)最大，為0.9002。其次是嘉陵黑山羊與營(yíng)山黑山羊之間相似系數(shù)為0.8953，會(huì)理黑山羊與江安黑山羊之間相似系數(shù)最小，為0.7424。群體基因分化系數(shù)(Gst)為0.2766，說(shuō)明黑山羊種群的分化程度還比較低。用UPGMA法構(gòu)建了黑山羊群體間樹(shù)狀聚類圖，結(jié)果顯示：嘉陵黑山羊與營(yíng)山黑山羊首先聚—起，金堂黑山羊與樂(lè)至黑山羊

5、也先聚—起，說(shuō)明它們親緣關(guān)系較近，可能起源于共同的原始祖先。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為黑山羊品種的保護(hù)提供了重要的科學(xué)依據(jù)。 其次，我們利用20個(gè)多態(tài)性較強(qiáng)、重復(fù)性好的隨機(jī)引物對(duì)四川多個(gè)黑山羊種群的成年(1.5～2歲)黑山羊96只個(gè)體的血樣DNA進(jìn)行擴(kuò)增，20個(gè)引物共擴(kuò)增出225條多態(tài)的RAPD條帶。對(duì)給定的標(biāo)記，將“有帶(1)”、“無(wú)帶(0)”兩類個(gè)體看作獨(dú)立樣本，采用SPSS軟件的Compare Means中的Independent-s

6、amples FTest來(lái)比較兩樣本各數(shù)量性狀平均值的差異。并根據(jù)兩獨(dú)立樣本間個(gè)體表型值的分布篩選與性狀真實(shí)關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)記。結(jié)果表明，在黑山羊群體中共篩選到5個(gè)分子標(biāo)記分別與不同性狀相關(guān)，其遺傳基礎(chǔ)可能是該標(biāo)記與控制性狀的QTL或主基因連鎖。 第三，我們以10個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，對(duì)四川樂(lè)至黑山羊、金堂黑山羊、富順黑山羊、白玉黑山羊、會(huì)理黑山羊、嘉陵黑山羊、營(yíng)山黑山羊、合江黑山羊、江安黑山羊進(jìn)行了遺傳多態(tài)性研究。結(jié)果表明，10個(gè)微衛(wèi)星座

7、位在9個(gè)黑山羊種群中為高度多態(tài)座位。基于Nei氏標(biāo)準(zhǔn)遺傳距離Da，采用13PGMA方法構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)。9個(gè)黑山羊種群遺傳距離在0.386-O.769之間，聚為4類，嘉陵黑山羊與營(yíng)山黑山羊親緣關(guān)系最近，在D=0.386處聚為1類；富順黑山羊與江安黑山羊先在D=0.428處聚為l類后再在D=0.456處與合江黑山羊聚為1類；此外金堂黑山羊與樂(lè)至黑山羊在D=0.437處聚為1類；白玉黑山羊與會(huì)理黑山羊在D=0.489處聚為1類。結(jié)果同時(shí)顯示

8、9個(gè)黑山羊種群的分子系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系與生態(tài)地理分布一致。本研究的10個(gè)微衛(wèi)星測(cè)定9個(gè)黑山羊種群平均PIC和平均雜合度均大于0.5，說(shuō)明9個(gè)黑山羊種群內(nèi)遺傳多樣性均較高。此結(jié)果同RAPD分析和mtDNA測(cè)序分析的結(jié)果一致。 最后，我們采用DNA測(cè)序技術(shù)首次測(cè)定了四川9個(gè)黑山羊品種(類群)30個(gè)個(gè)體線粒體DNA控制區(qū)(D-100p)全序列，結(jié)果表明：四川黑山羊線粒體DNA控制區(qū)全序列長(zhǎng)度為1212bp，T、C、A、G4種核苷酸的含量分別

9、為28.9％、25.9％、31.2％、14％。檢測(cè)到87個(gè)變異位點(diǎn)，約占分析位點(diǎn)總數(shù)的7.18％，核苷酸變異類型有轉(zhuǎn)換、顛換、缺失3種。確定了25種單倍型，單倍型H7、H11和H13為四川黑山羊的主體單倍型，各單倍型在品種間分布不平衡，所測(cè)定的9個(gè)黑山羊品種(類群)單倍型多樣度平均為0.9839±0.014l，說(shuō)明四川黑山羊D-loop單倍型類型豐富。四川黑山羊品種間核苷酸分歧度(Dxy)約為1.0％-3.6％，品種間雙參數(shù)距離范圍為0