應(yīng)用微衛(wèi)星DNA對(duì)Holstein奶牛進(jìn)行親子鑒定.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的目的在于通過使用微衛(wèi)星DNA檢測(cè)荷斯坦牛的遺傳多態(tài)性，進(jìn)而建立一種適用于牛的親子鑒定體系。 微衛(wèi)星DNA(又稱短串聯(lián)重復(fù)序列，或簡(jiǎn)單重復(fù)序列)是以1～6bp的短核苷酸為基本單位，首尾相連組成的串聯(lián)重復(fù)序列。大多數(shù)重復(fù)單位是二核苷酸，也有少量含有1、3至6個(gè)核苷酸的重復(fù)單位，重復(fù)次數(shù)一般在5次以上，可高達(dá)100次，片段長(zhǎng)度通常在400bp以下。微衛(wèi)星DNA由其核心序列和兩側(cè)的側(cè)翼序列構(gòu)成，側(cè)翼序列使某一微衛(wèi)星特異定位在染色

2、體的一定位置，核心序列重復(fù)數(shù)的不同是構(gòu)成微衛(wèi)星多態(tài)性的基礎(chǔ)。大于10次重復(fù)的微衛(wèi)星DNA序列具有高度的種屬多態(tài)性，從植物到脊椎動(dòng)物這種多態(tài)性有很大的差別。正是由于微衛(wèi)星DNA序列具有長(zhǎng)度多態(tài)性的特點(diǎn)，它可用來對(duì)動(dòng)物進(jìn)行親子鑒定。 本文選用聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)和國(guó)際動(dòng)物遺傳學(xué)會(huì)(ISAG)聯(lián)合推薦的用于牛遺傳分析的12個(gè)微衛(wèi)星基因座，利用PCR和聚丙烯酰胺電泳銀染技術(shù)對(duì)來自不同牛場(chǎng)的100頭荷斯坦牛進(jìn)行了遺傳多態(tài)性檢測(cè)。12個(gè)

3、STR基因座的雜合度、多態(tài)信息含量、有效等位基因數(shù)的均值為0.8711、0.8574、8.1666，這些基因座的遺傳雜合度及多態(tài)信息含量高，均為高度多態(tài)位點(diǎn)，12個(gè)STR的累積非父排除概率為98.999999％，適用于動(dòng)物的遺傳分析和個(gè)體鑒定。 應(yīng)用這12個(gè)微衛(wèi)星基因座對(duì)三種不同情況的36頭不同家系的荷斯坦牛進(jìn)行了親子鑒定：第一種情況是給定父母雙方與子代，排除一方父母的情況；第二種情況是給定父母雙方與子代，排除父母雙方的情況；第

4、三種情況是給定一方父母與子代，排除其具有親緣關(guān)系的情況。結(jié)果顯示三種不同情況下都能成功認(rèn)定其生物學(xué)親緣關(guān)系，因此這12個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可以用作親權(quán)鑒定的微衛(wèi)星標(biāo)記組合。 本實(shí)驗(yàn)還對(duì)多重PCR的反應(yīng)條件進(jìn)行了探索，成功地優(yōu)化到了該12個(gè)基因座四組三重PCR反應(yīng)條件。四組分別為： 組合1：ETH10-BM1824-ETH22 組合2：BM1818-INRA023-CSSM66 組合3：ILSTS006-THLA5

5、3-INRA037 組合4：INRA063-HEL9-TGLA126 利用多重PCR可以對(duì)動(dòng)物進(jìn)行遺傳分析，但因微衛(wèi)星片段長(zhǎng)度大多為100-300bp，且位點(diǎn)多態(tài)性高，同一位點(diǎn)片段長(zhǎng)度在不同群體中跨度大，所以在多重PCR的結(jié)果分析圖上，非特異性條帶多，或者有條帶重疊而導(dǎo)致判讀錯(cuò)誤。因此在親子鑒定中，如果不能使用熒光多重PCR進(jìn)行分析，那么還是單個(gè)位點(diǎn)的PCR分析結(jié)果更適合于親子鑒定。 一般認(rèn)為微衛(wèi)星DNA多態(tài)性產(chǎn)