脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、黃芩苷等誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及其凋亡相關(guān)因子的初步研究.pdf

1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)是由鐮刀菌屬病原真菌產(chǎn)生的真菌毒素之一，在自然界廣泛存在，可引起人畜中毒。本實驗采用不同濃度的DON作用于PIEC、HUVEC和Lovo三種細(xì)胞24h，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)變化，MTT法測定細(xì)胞增殖的變化，TUNEL 法檢測DON誘導(dǎo)這三種細(xì)胞凋亡的凋亡率，用免疫組織化學(xué)染色方法測定DON誘導(dǎo)這三種細(xì)胞凋亡過程中Caspase-9和Bax表達(dá)的變化，結(jié)果顯示，高濃度DON可明顯改變細(xì)胞的形態(tài)，不同濃度的DO

2、N均可抑制細(xì)胞的增殖，相同濃度下對PIEC的抑制作用最顯著(統(tǒng)計學(xué)比較P＜0.05)。用 TUNEL檢測凋亡率，結(jié)果顯示不同濃度的DON對這三種細(xì)胞均有誘導(dǎo)凋亡的作用，對于PIEC和LOVO而言，在DON濃度為500ng/ml時，凋亡率達(dá)到最高(71.74％)，HUVEC則在DON濃度為5μg/ml時，凋亡率達(dá)到最高(26.61％)，此后隨濃度的升高，凋亡率下降，可能與凋亡細(xì)胞崩解脫離細(xì)胞片有關(guān)。同時，根據(jù)試驗結(jié)果，初步推斷，DON誘導(dǎo)

3、PIEC凋亡可能與Caspases途徑有關(guān)，凋亡促進基因Bax在其中起到了一定的凋亡促進作用，而在誘導(dǎo)HUVEC和Lovo細(xì)胞凋亡的過程中未檢測到Caspase-9和Bax的變化，故認(rèn)為DON誘導(dǎo)這兩種細(xì)胞凋亡與Caspases途徑無關(guān)，與促凋亡因子Bax無關(guān)。本試驗還對兩種中藥單體成分——黃芩苷和脫水穿心蓮內(nèi)酯，及阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo三種胃腸道癌細(xì)胞凋亡及在凋亡過程中Caspase-9和Bax的表達(dá)的變化進

4、行了初步研究，結(jié)果顯示，三種藥物均可誘導(dǎo)這三種細(xì)胞的凋亡，其中，黃芩苷誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞的凋亡率最高，BGC-823次之；脫水穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)HCT-8細(xì)胞的凋亡率最高，BGC-823次之；阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823和HCT-8的凋亡率高于其誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞的凋亡率，試驗中還發(fā)現(xiàn)，黃芩苷和阿司匹林誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞凋亡，凋亡率在96h時達(dá)到最高，而到一周時凋亡率下降。本試驗通過免疫組化方法檢測三種藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中Caspase-9和Ba

5、x的變化。結(jié)果顯示，誘導(dǎo)凋亡過程中Caspase-9的表達(dá)均有升高，推測這三種藥物誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo三種細(xì)胞凋亡與Caspases途徑有關(guān)。而凋亡抑制基因Bax在脫水穿心蓮內(nèi)酯誘導(dǎo)Lovo細(xì)胞凋亡中表達(dá)未檢測到變化，推測該細(xì)胞凋亡過程與Bax無關(guān)。除此以外，Bax在黃芩苷、脫水穿心蓮內(nèi)酯和阿司匹林誘導(dǎo)BGC-823、HCT-8和Lovo細(xì)胞中的表達(dá)均有升高，Bax在凋亡過程中可能起到凋亡促進作用。另外，本試驗還用P