脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感細(xì)胞篩選.pdf

1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)廣泛存在于世界范圍內(nèi)的谷物及其制品中，并可引起人和動(dòng)物中毒，但其作用機(jī)制至今仍不十分清楚。本實(shí)驗(yàn)以不同組織來(lái)源的細(xì)胞為研究對(duì)象，從細(xì)胞毒性、凋亡形態(tài)學(xué)和早期凋亡檢測(cè)三方面來(lái)比較細(xì)胞對(duì)DON的敏感性，為進(jìn)一步研究DON誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)一： 本試驗(yàn)采用不同組織來(lái)源的細(xì)胞(BHK-21、PIEC、HT-29、CHO-K1、BGC-823、BT-325和HL-7702)為研究對(duì)象，用

2、不同濃度的DON(DON終濃度分別為125 ng/mL，250 ng/mL，500 ng/mL，1000 ng/mL,2000 ng/mL)處理不同時(shí)間(24 h、48 h和72 h)后，通過(guò)MIT分析法測(cè)定細(xì)胞增殖的變化，對(duì)比各細(xì)胞的敏感性。結(jié)果顯示：不同濃度的DON均可抑制細(xì)胞的增殖，劑量越大抑制率越高，且與對(duì)照組相比差異極顯著(P<0.01)。500～2000 ng/mL濃度組，除CHO-K148 h和72 h段結(jié)果相近外，其它細(xì)

3、胞三個(gè)時(shí)間段的抑制率呈顯著的時(shí)間效應(yīng)關(guān)系(P<0.05).各時(shí)間段1000和2000 ng/mL組抑制率相比較，除了BGC-823和BT-325外，其它細(xì)胞的差異不顯著。由IC50結(jié)果得出BHK-21是最敏感的細(xì)胞，HL-7702敏感性最低。DON處理24 h時(shí)BHK-21的IC50為333ng/mL，其它六種細(xì)胞均大于2000 ng/mL。48 h測(cè)定結(jié)果從高到低依次為BHK-21>PIEC>HT-29>CHO-K1>BGC-823>

4、BT-325>HL-7702.IC50分別為320,361,598,620，1048，1485，>2000 ng/mL.72 h的檢測(cè)結(jié)果從高到低依次為：BHK-21>PIEC>HT-29> CHO-K1>BT-325>BGC-823>HL-7702, IC50分別為228,238,438,678,832，908，>2000 ng/mL。結(jié)論：DON對(duì)七種細(xì)胞均有毒性，根據(jù)細(xì)胞來(lái)源不同，毒性大小也有差異。DON的細(xì)胞毒性存在時(shí)間和劑量效

5、應(yīng)關(guān)系，并且與細(xì)胞的生長(zhǎng)速度有關(guān)。BHK-21是所選細(xì)胞系中對(duì)DON最敏感的的細(xì)胞，HL-7702敏感性最低。 實(shí)驗(yàn)二： 本實(shí)驗(yàn)采用不同組織來(lái)源的細(xì)胞(BHK-21、PIEC、HT-29、CHO-K1、BGC-823、BT-325和HL-7702)為模型，用不同的濃度DON(DON的終濃度分別為125 ng/mL，250 ng/mL，500 ng/mL，1000 ng/mL，2000 ng/mL)處理24 h。染色后作形

6、態(tài)學(xué)觀察和流式細(xì)胞儀測(cè)定凋亡率，對(duì)比細(xì)胞對(duì)DON的敏感性.并用彗星實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DON對(duì)敏感細(xì)胞的DNA損傷情況。結(jié)果顯示：不同濃度DON對(duì)七種細(xì)胞均有誘導(dǎo)凋亡的作用。細(xì)胞的形態(tài)變化和凋亡率與DON呈顯著的劑量效應(yīng)關(guān)系。除BGC-823的125 ng/mL組外，每種細(xì)胞各濃度組的凋亡率都顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。細(xì)胞壞死率所占百分比均小于5％，且各細(xì)胞的凋亡率均在2000 ng/mL劑量組達(dá)到最高.結(jié)論：DON對(duì)所選七種細(xì)胞均有誘導(dǎo)凋亡