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文檔簡介
1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學結構和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種,主要污染小麥、玉米等谷物及其制品,溫帶地區(qū)的谷物污染嚴重,在收割季節(jié)如雨量偏多則 DON 的污染更為嚴重。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇不僅可以導致動物:產(chǎn)生急性毒性、生殖毒性、免疫毒性,而且與人的癌癥相關。及時對食品及其原料中的DON進行檢測,防止其污染的食品進入食物鏈,是預防真菌毒素對人和動物帶來
2、危害的主要手段。 SELEX技術即配體指數(shù)富集的系統(tǒng)進化技術 (Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX),是一種新型的體外篩選技術。適配子(aptamer) 是運用 SELEX 技術從體外人工合成的隨機寡核苷酸庫中反復篩選得到的、能以極高的親和力和特異性與靶分子結合的一段或者幾段寡核苷酸序列。 適配子的功能類似于抗體但明顯優(yōu)于抗體,具
3、有靶分子范圍廣、親和力和特異性高、制備方便、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,在臨床治療和診斷方法等方面都具有廣闊的應用前景。本研究旨在運用SELEX技術從人工體外合成的隨機ssDNA文庫中篩選到針對DON的特異性適配子,為建立檢測DON的快速而簡便的方法奠定基礎。 本研究先將毒素DON連接到蛋白質(zhì)上合成全抗原。體外合成一個全長87個核苷酸中間含45個隨機序列的隨機 ssDNA 文庫,以偶聯(lián)有DON的全抗原為靶分子,通過SELEX技術篩選DON特
4、異性適配子,利用生物素-鏈親和素-辣根過氧化物酶系統(tǒng)檢測每輪ssDNA文庫與DON的親和力,將最后一輪篩選產(chǎn)物克隆測序并運用相關軟件進行適配子序列一級結構和二級結構分析。 經(jīng)過10輪的篩選和擴增,得到了DON特異性的適配子,每輪ssDNA文庫與DON的親和力呈上升趨勢。21個適配子序列全長 87 bp,根據(jù)一級結構序列的同源性確定,一共有12種不同的核苷酸序列。其中7號適配子結構穩(wěn)定,親和力高,其序列將是我們今后研究的重點。二級
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