氧化應(yīng)激在脫氧雪腐鐮刀菌烯醇致HepG2細(xì)胞DNA損傷中的作用.pdf

1、目的：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇是一種單端孢霉烯毒素，廣泛的存在于發(fā)霉的小麥，大麥，玉米等糧谷類農(nóng)作物及其食品中。污染率較高，目前認(rèn)為DON是存在于赤霉病小麥中的主要天然毒素之一，是世界范圍內(nèi)糧食飼料的污染物之一，對(duì)人畜構(gòu)成很大危害，已被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織確定為最危險(xiǎn)的自然發(fā)生食品污染物。 國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）將DON對(duì)人類的致癌性

2、劃歸為列第三類，即現(xiàn)有證據(jù)尚不能就其對(duì)人類致癌性進(jìn)行分類。體外試驗(yàn)顯示，DON可引起染色體畸變。DON能引起質(zhì)脂過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）的產(chǎn)生。肝臟是DON代謝的主要部位。有研究顯示DON具有遺傳毒性，這有可能與自由基和活性氧（ROS）的產(chǎn)生有關(guān)。因此，本研究試探討DON引起的DNA損傷是否與氧化應(yīng)激有關(guān)。本研究選用一種代謝完全的人類來源的肝腫瘤細(xì)胞株HepG2細(xì)胞，它不僅保持了人正常肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的許多功能，還保留了一系列生物轉(zhuǎn)化過程中

3、的Ⅰ相和Ⅱ相酶，是檢測(cè)外來化合物遺傳毒性的理想細(xì)胞系。 本研究選用HepG2細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，探討脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的DNA損傷作用及可能的機(jī)制，旨在為評(píng)估脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)人類健康的危害性提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法：以HepG2細(xì)胞作為試驗(yàn)系統(tǒng)。通過單細(xì)胞凝膠電泳（SCGE）試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞DNA損傷，在彗星試驗(yàn)的基礎(chǔ)上用抗氧化劑羥基酪醇（HT）做DNA保護(hù)。為探討其可能的氧化性機(jī)制，以2’，7’-二氫二氯熒光素（DCFH）

4、法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，用硫代巴比妥酸反映物（TBARS）測(cè)定法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平，以免疫組化方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的表達(dá)水平。 結(jié)果：3．75μM～30μM的DON作用于HepG2細(xì)胞后，引起細(xì)胞的DNA鏈斷裂，DNA的遷移距離明顯增加，且呈劑量依賴關(guān)系。用25、50、100μM的HT預(yù)處理HepG2細(xì)胞30min后，DNA的遷移距離明顯減少，DON引起的DNA損傷幾乎完全被防止，且隨著

5、HT劑量增加，DNA的損傷程度減小，呈劑量依賴關(guān)系，提示DON誘發(fā)HepG2細(xì)胞的DNA損傷預(yù)氧化應(yīng)激有關(guān)。15μM～60μM的DON作用于HepG2細(xì)胞1h可引起細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)水平的顯著增加。3．75μM～15μM的DON作用與細(xì)胞24 h后，TBARS增多。7．5μM～60μM的DON作用與細(xì)胞3h后，細(xì)胞內(nèi)8-OHdG表達(dá)水平增強(qiáng)。均呈劑量依賴關(guān)系。 結(jié)論：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇可致HepG2細(xì)胞DNA損傷，其作用機(jī)制可能與