丹參復(fù)方傳遞體及普通脂質(zhì)體的研究.pdf

1、研究背景： 傳遞體(transfersomes，TF)，又叫柔性納米脂質(zhì)體、變形脂質(zhì)體。在脂質(zhì)體膜材中加入膽酸鈉或去氧膽酸鹽，便賦予了該脂質(zhì)體高度的變形性，TF能夠自發(fā)的穿過(guò)皮膚屏障。傳遞體作為載體可以攜帶轉(zhuǎn)運(yùn)大、小分子量的藥物進(jìn)入人體。 經(jīng)皮給藥具有其他給藥方式所不具有的優(yōu)點(diǎn)，包括：可以避免肝臟首過(guò)效應(yīng)，藥物釋放連續(xù)性，避免副作用，使患者易接受等特點(diǎn)。然而，皮膚的天然屏障作用限制了許多藥物的透過(guò)性。近年來(lái)脂質(zhì)體作為藥物

2、載體用于經(jīng)皮給藥的作用已經(jīng)越來(lái)越引起關(guān)注，但是仍存有爭(zhēng)議。許多相關(guān)報(bào)道引證了脂質(zhì)體經(jīng)皮轉(zhuǎn)運(yùn)作用的局限性，是由于其組成。 新型的具有高度變形性的類脂囊泡——傳遞體，據(jù)報(bào)道可以穿越完整的皮膚，傳遞體被確定是一種特殊的類脂囊泡微粒，內(nèi)部包含水相隔室，外部包圍著磷脂雙分子層具有特殊的變形性。形態(tài)學(xué)上，傳遞體類似于脂質(zhì)體和類脂囊泡，功能上傳遞體具有充分的變形性，可以通過(guò)比自身小數(shù)倍的孔徑。他們處于一種亞穩(wěn)定狀態(tài)，這使得囊泡的膜表面具有流動(dòng)

3、易變性，因此而具有高度的變形性。雙分子層膜顯著的適應(yīng)能力允許傳遞體囊泡調(diào)整自身以適應(yīng)并穿過(guò)小孔。傳遞體的磷脂雙分子層薄膜比一般的類脂囊泡和脂質(zhì)體具有高數(shù)倍的彈性。在制備脂質(zhì)體的類脂膜材中加入一種或幾種表面活性劑，可以得到具有變形性的傳遞體。 研究目的： 丹參具有活血化瘀的有效部位主要為水溶性丹酚酸類和脂溶性丹參酮類。丹參酮類物質(zhì)具有菲醌類的片狀剛性結(jié)構(gòu)，在水中幾乎不溶，限制了生物利用度。探討以丹參脂溶性成分為模板制備傳遞

4、體的組成，考察表面活性劑膽酸鈉的影響。觀察丹參脂溶性成分傳遞體和普通脂質(zhì)體的形態(tài)學(xué)、測(cè)量粒徑分布、藥物含量、包封率、以及變形性。研究不同組成的脂質(zhì)體的電荷，以及在37℃和4℃下保存的穩(wěn)定性。 方法： 薄膜分散法制備丹參復(fù)方傳遞體：精密稱取適量磷脂，膽酸鈉，丹酚酸，丹參脂溶性成分提取物溶解于氯仿：甲醇(1∶1v/v)的混合有機(jī)溶劑中，丹酚酸在有機(jī)溶劑中的溶解性低，混合溶液呈淺棕色混懸液，將混懸液轉(zhuǎn)移至50ml圓底燒瓶中，置

5、于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀連接循環(huán)水式真空泵，將燒瓶置于水浴中，水浴溫度42℃，開(kāi)啟真空泵，開(kāi)啟冷凝管水龍頭。注意維持負(fù)壓在0.05MPa。丹酚酸與磷脂作用分散形成藥物磷脂薄膜，使用0.9％氯化鈉注射液在室溫下旋轉(zhuǎn)30min(60r/min)水合后，在冰浴條件下，超聲處理1min后(固有頻率的40％，40W)，經(jīng)0.22um微孔濾膜過(guò)濾，所得棕紅色丹參復(fù)方傳遞體混懸液于4℃冰箱保存。 使用動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)測(cè)量，比較分析不同方法制備

6、的丹參復(fù)方傳遞體，以及逆向蒸發(fā)法制備的丹酚酸和丹參復(fù)方傳遞體的化學(xué)特性，極性，粒徑，電荷及多分散度。吸取1ml制得的相應(yīng)樣品至測(cè)量杯中，所選激光光源波長(zhǎng)為633.0nm，于常溫下測(cè)試，經(jīng)樣品散射后的光在90°范圍內(nèi)變化不同角度來(lái)檢測(cè)。光信號(hào)用256通道、高速數(shù)字相關(guān)器進(jìn)行處理。 將少許丹參復(fù)方傳遞體混懸液稀釋后取一滴置于有支持膜的銅網(wǎng)上，用1％磷鉬酸進(jìn)行負(fù)染，以濾紙吸收邊緣液體，干燥后先用磷鉬酸與樣品按照1∶3(v/v)的比例混

7、合后再滴涂，自然涼干，于透射電鏡下觀測(cè)并照相。 測(cè)量通過(guò)納米孔徑生物膜屏障的類脂混懸液流量，檢測(cè)穿越屏障壓力梯度的機(jī)能。實(shí)驗(yàn)方法：5ml受試混懸液在一定外壓下，通過(guò)0.22um微孔濾膜的性能。更換不同孔徑尺寸的微孔濾膜測(cè)量類脂囊泡通過(guò)性能。首先記錄5ml純水透過(guò)微孔濾膜所需時(shí)間，然后記錄傳遞體混懸液5ml透過(guò)同一濾膜所需的時(shí)間計(jì)算相對(duì)透過(guò)速率P=Vtf/Vwater×100％ 結(jié)果： 優(yōu)化處方工藝制備得到的丹參脂

8、溶性成分提取物傳遞體的粒徑、分布測(cè)試結(jié)果分別給出體均粒徑(VolumeMean)為101.2nm，數(shù)均粒徑(NumberMean)為97.2nm，強(qiáng)度徑(IntensityMean)為102.2nm，多分散度(Polydispersity)為0.19，數(shù)均粒徑結(jié)果與透射電鏡測(cè)得的平均粒徑結(jié)果相一致。不含膽酸鈉的丹參脂溶性成分提取物普通脂質(zhì)體的體均粒徑(VolumeMean)為112.6nm，數(shù)均粒徑(NumberMean)為111.4n

9、m，強(qiáng)度徑(IntensityMean)為114.4nm，多分散度(Polydispersity)為0.24。制備得到有乳光、透光性、穩(wěn)定性好的玫瑰紅色傳遞體。在透射電鏡下觀察傳遞體呈球狀，均勻分布在視野中，可見(jiàn)脂質(zhì)體的雙層磷脂膜。在同樣條件下觀察，丹參脂溶性成分傳遞體成大小不等的雙同心球體，可見(jiàn)類脂雙分子層膜，雙層膜之間包裹丹參脂溶性成分。高效液相色譜法測(cè)定脂質(zhì)體中含藥量，加樣回收率99.6％，RSD為0.47％；精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD

10、為0.36％，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果RSD為0.99％。本實(shí)驗(yàn)建立的丹參脂溶性成分提取物傳遞體中藥物含量測(cè)定方法可靠。穩(wěn)定性考察表明丹參脂溶性成分傳遞體和普通脂質(zhì)體在低溫下保存3個(gè)月和6個(gè)月后包封率分別有所降低，傳遞體由62.3％降至50.3％、43.2％；普通脂質(zhì)體由55.3％降至46.5％、38.5％。變形性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：傳遞體具有比普通脂質(zhì)體更好的變形性，可以推斷類脂膜材中加入膽酸鈉的傳遞體可以顯著增溶疏水性丹參脂溶性成分，提高變形性。

11、 結(jié)論： 通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：所制備丹參脂溶性成分傳遞體和普通脂質(zhì)體，其粒徑在100nm左右，粒徑分布均勻；建立了丹參脂溶性成分傳遞體的含量測(cè)定方法，方法回收率與精密度實(shí)驗(yàn)表明此方法可靠，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，易行；通過(guò)正交設(shè)計(jì)法，得出了制備丹參脂溶性成分提取物傳遞體的最佳工藝：磷脂與膽酸鈉重量比(4∶1)、磷脂與丹參脂溶性成分提取物重量比(20∶1)、蒸發(fā)溫度(42℃)、超聲時(shí)間(1min)；含有膽酸鈉的柔性脂質(zhì)體比普通剛性脂