豬頸動(dòng)脈支架術(shù)后PPAR-γ的表達(dá)及對(duì)血管平滑肌表型轉(zhuǎn)化影響.pdf

1、近年來,隨著血管內(nèi)介入技術(shù)及介入器材的不斷發(fā)展,腦血管支架植入治療作為一種新的診療方法,因其具有微創(chuàng)、安全及有效的特點(diǎn),在缺血性卒中的二級(jí)預(yù)防中得到了廣泛的運(yùn)用,顯著降低了卒中的復(fù)發(fā)率,并有效的改善了卒中患者的預(yù)后。但術(shù)后6個(gè)月有20％~30%的患者發(fā)生再狹窄,再狹窄的發(fā)生嚴(yán)重影響了腦血管支架植入術(shù)的遠(yuǎn)期療效,因此支架內(nèi)再狹窄是臨床面對(duì)的挑戰(zhàn),再狹窄的防治是腦血管病微創(chuàng)治療后的重點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　目前,再狹窄發(fā)生機(jī)制尚未明確,臨床上

2、仍缺乏有效的防治手段,對(duì)再狹窄的機(jī)制進(jìn)行深入研究是尋找行之有效防治途徑的前提。腦血管支架植入術(shù)后再狹窄的發(fā)生是一個(gè)復(fù)雜的過程,具有多種因素參與,其過程包括了血栓在血管內(nèi)支架植入術(shù)后的早期形成、中晚期的內(nèi)膜增生及血管重塑。既往針對(duì)血管再狹窄的防治研究著眼點(diǎn)主要在內(nèi)膜的變化,阻止血管內(nèi)膜和基質(zhì)增生,包括藥物干預(yù)、新型支架技術(shù)等多集中于促進(jìn)血管內(nèi)膜的再內(nèi)皮化,而血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)

3、的表型轉(zhuǎn)化在近年來支架植入后再狹窄中的作用備受學(xué)者們的關(guān)注,成為研究血管重構(gòu)過程中的熱點(diǎn)。研究結(jié)果提示VSMC的增殖、遷移是血管再狹窄的主要原因和病理生理基礎(chǔ)。而過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)對(duì)腦血管重構(gòu)有重要的調(diào)控作用。
　　PPAR-γ是一種核轉(zhuǎn)錄因子,需要配體激活發(fā)揮生物學(xué)作用,具有多種生物學(xué)效應(yīng),如調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝

4、和糖代謝、抗動(dòng)脈粥樣硬化、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化和凋亡等。豬與人在血管支架植入后的組織病理學(xué)變化基本相同,本實(shí)驗(yàn)擬采用小型豬建立頸動(dòng)脈支架植入術(shù)后模型并對(duì)部分支架植入動(dòng)物模型給予PPAR-γ激動(dòng)劑藥物羅格列酮干預(yù),觀察PPAR-γ的表達(dá)變化及對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化的影響,旨在探討PPAR-γ對(duì)VSMC表型轉(zhuǎn)化的影響及其機(jī)制,為臨床腦血管支架植入后再狹窄的防治提供理論依據(jù)。
　　目的:通過建立豬頸動(dòng)脈支架植入模型,應(yīng)用血管造影、病理學(xué)研究、分

5、子生物學(xué)及免疫組織化學(xué)等方法,觀察支架段血管病理組織形態(tài)及核轉(zhuǎn)錄因子PPAR-γ、平滑肌22α(smooth muscle22 alpha,SM22α)蛋白的表達(dá)變化及對(duì)血管重構(gòu)的影響,初步探討PPAR-γ在豬頸動(dòng)脈支架植入后再狹窄中的作用及機(jī)制。
　　方法:健康巴馬小型豬12只,隨機(jī)分為3組,植入支架組、植入支架并給予羅格列酮(rosiglitazone,ROSI)喂養(yǎng)組和正常對(duì)照組。正常對(duì)照組不植入支架,其余兩組于隨機(jī)一側(cè)頸動(dòng)

6、脈行球囊擴(kuò)張并植入金屬裸支架(bare metal Stent,BMS),于支架植入術(shù)前、術(shù)后即刻以及術(shù)后12周行血管造影了解血管重構(gòu)的情況。于術(shù)后12周處死動(dòng)物,取支架植入段頸動(dòng)脈,利用普通病理技術(shù)、免疫組織化學(xué)及蛋白質(zhì)印跡(Western Blot, WB)方法檢測(cè)頸動(dòng)脈血管病理變化以及PPAR-γ與SM22α的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1)血管造影顯示豬頸動(dòng)脈球囊擴(kuò)張并支架植入時(shí)的直徑為(4.88±0.12)mm,支

7、架植入以后12周再造影發(fā)現(xiàn)支架內(nèi)狹窄,支架內(nèi)直徑為(3.41±0.15)mm,狹窄程度為(1.46±0.14) mm;ROSI組支架植入時(shí)的直徑為(5.08±0.11)mm,與支架植入組支架植入血管時(shí)的直徑無顯著差異(P>0.05),支架植入以后12周造影,支架內(nèi)直徑為(4.17±0.12)mm,狹窄程度為(0.91±0.13) mm。血管支架植入12周后血管造影顯示支架植入組較ROSI組的血管狹窄程度顯著(P<0.05);
　　

8、2) HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)支架植入組可見血管中膜層彈力纖維排列紊亂,增生內(nèi)膜可見大量 VSMC,ROSI組血管 HE染色中膜層彈力纖維排列基本有序,血管內(nèi) VSMC增生不明顯。免疫組化結(jié)果示:PPAR-γ在正常對(duì)照組血管中的表達(dá)評(píng)分為(5.85±0.29),在支架植入組血管的表達(dá)評(píng)分為(0.90±0.22),在ROSI組血管的表達(dá)評(píng)分為(5.04±0.46);PPAR-γ在支架植入組血管中的表達(dá)評(píng)分較正常對(duì)照組與ROSI組低(P<0.05)

9、,PPAR-γ在ROSI組與正常對(duì)照組中的表達(dá)無顯著差異(P>0.05);
　　3) Western blot結(jié)果示:PPAR-γ/SM22α在正常對(duì)照組的表達(dá)為(19.87±5.33)%/(68.85±9.73)%,在支架植入組的表達(dá)為(3.12±1.42)%/(16.72±5.34)%,在ROSI組的表達(dá)為(23.17±4.23)%/(58.63±12.81)%。PPAR-γ/SM22α在支架植入組的表達(dá)低于正常對(duì)照組的表達(dá)(

10、P<0.05),VSMC表型由收縮型向合成型轉(zhuǎn)化;PPAR-γ/SM22α在 ROSI組的表達(dá)高于支架植入組(P<0.05),VSMC表型由合成型向收縮型轉(zhuǎn)化;ROSI組與正常對(duì)照組相比,PPAR-γ/SM22α表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.支架植入可以誘發(fā)支架再狹窄;
　　2.支架植入后誘導(dǎo)的PPAR-γ表達(dá)變化可能通過調(diào)節(jié)血管平滑肌表型轉(zhuǎn)化參與了支架植入后再狹窄的調(diào)節(jié);
　　3. PP