子癇前期患者胎盤組織中晚期糖基化終產(chǎn)物受體、P-選擇素的基因表達(dá)及意義.pdf

1、背景與目的:
　　 子癇前期(preeclampsia PE)為妊娠期高血壓疾病中的一種,是妊娠期特有疾病,是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍生兒死亡的一個(gè)重要原因,因而多年來(lái)一直是國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)課題。子癇前期的病因和發(fā)病機(jī)制及其復(fù)雜,且至今尚無(wú)統(tǒng)一的觀點(diǎn)。近年來(lái)炎癥反應(yīng)在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用逐漸受到重視,體內(nèi)外各種影響因素導(dǎo)致胎盤氧化應(yīng)激,釋放大量胎盤炎性因子,從而導(dǎo)致炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)皮細(xì)胞受損的發(fā)生,此機(jī)制受到目前國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者的認(rèn)

2、可。
　　 P-選擇素(P-selectin)被稱為參與炎癥反應(yīng)的典型黏附分子代表,是啟動(dòng)炎癥反應(yīng)和維持炎性狀態(tài)的一個(gè)關(guān)鍵因素。它是細(xì)胞黏附分子(cell adhesionmolecules cAMs)中選擇素家族的主要成員,通常儲(chǔ)存在內(nèi)皮細(xì)胞的分泌顆粒、靜止的血小板顆粒及致密顆粒中,當(dāng)其受到組胺、凝血酶、缺氧及氧化應(yīng)激等刺激時(shí),表達(dá)量可迅速增高,參與炎癥反應(yīng)的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),妊娠期間P-selectin在母胎界面的細(xì)胞內(nèi)表達(dá),

3、當(dāng)其在體內(nèi)的表達(dá)明顯增加時(shí),可激活血小板,釋放大量血小板活化因子(PAF),增強(qiáng)炎癥反應(yīng),激活多核巨細(xì)胞(RMN),進(jìn)而破壞內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和完整性,導(dǎo)致微血管堵塞及血管收縮功能障礙,胎盤供血量明顯減少,胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育受到限制。這可能是子癇前期發(fā)生、發(fā)展的主要病理機(jī)制之一。
　　 晚期糖基化終產(chǎn)物受體(recepor of advanced glycation end products RAGE)是免疫球蛋白超家族的成員,是典型的

4、單跨膜片段受體。人RAGE基因位于6號(hào)染色體上(6p21.3),有近400個(gè)氨基酸殘基組成。RAGE功能復(fù)雜,可與多種配體結(jié)合,通過(guò)細(xì)胞P21Ras、分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、cdc42／rac、JAK(Janus激酶)／STAT(信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factor-κBNF-κ B)等多種傳導(dǎo)通路激活細(xì)胞內(nèi)部各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,誘導(dǎo)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能紊亂,參與多種疾病的發(fā)生。Cooke等報(bào)道,正常

5、孕婦胎盤、子宮肌層內(nèi)均有RAGE的表達(dá),并且子癇前期患者的RAGE表達(dá)明顯高于正常孕婦。另外,RAGE的配體在子癇前期患者血清及胎盤中的表達(dá)也明顯升高,提示RAGE可能參與了在子癇前期的病理過(guò)程。
　　 本文運(yùn)用免疫組化SP法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE、P-selectin表達(dá)水平的變化,研究?jī)梢蜃釉谡Ｔ袐D和子癇前期患者胎盤組織中的分布和表達(dá)情況,從而探討兩因子與子癇前期發(fā)

6、病及病情程度的相關(guān)性。
　　 材料與方法:
　　 1、臨床病歷資料
　　 選擇2009年5月至2009年12月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科住院的子癇前期患者40例(輕度患者20例,重度患者20例)作為實(shí)驗(yàn)組,平均年齡29.5±4.8歲,平均孕周36.5±2.4周,孕次2.3±0.4次；取同期30例正常孕婦為對(duì)照組,平均27.2±2.4歲,平均孕周38.5±4.6周,孕次2.1±0.6次。正常孕婦與輕、重度子癇前期

7、患者年齡、身高、體重等一般資料經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.10)。所選對(duì)象均無(wú)近期感染,無(wú)高血壓、糖尿病、腎病、反復(fù)流產(chǎn)史及免疫性疾病等病史,無(wú)其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版。分娩方式均為剖宮產(chǎn),陰道分娩者未入選。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法
　　 運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR法)從基因水平分別檢測(cè)正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE和P-selectin mRNA的表達(dá),應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(

8、SP法)從蛋白水平水平分別檢測(cè)正常孕婦和子癇前期患者胎盤組織中RAGE和P-selectin蛋白的表達(dá)。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 本數(shù)據(jù)采用SPSS16.0系統(tǒng)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,各組胎盤組織中RAGE,P-selectin mRNA和蛋白的表達(dá)采用方差分析,組間比較采用LSD-t檢驗(yàn),相關(guān)性分析用Spearman相關(guān),檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。
　　 結(jié)果:
　　 1、免疫組化染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)RAGE在各組

9、胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞中均有陽(yáng)性表達(dá),血管內(nèi)皮細(xì)胞中也有少量表達(dá),P-selectin主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞。
　　 實(shí)驗(yàn)組胎盤組織中RAGE、P-selectin的平均灰度值分別為:輕度子癇前期組121.10±13.01、125.86±9.13,重度子癇前期組152.06±12.31、161.09±11.37,對(duì)照組胎盤組織中RAGE、P-selectin的平均灰度值分別為101.08±6.72、106.54±9

10、.53；實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組,且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組(FRAGE=250.125,FP-selecting=274.044,P<0.01)。
　　 2、RT-PCR結(jié)果為實(shí)驗(yàn)組RAGE、P-selectin mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為:輕度子癇前期組0.455±0.059、0.417±0.052,重度子癇前期組0.863±0.097、0.763±0.049,對(duì)照組二者mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為:0.234±0.019

11、、0.318±0.026；實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組且重度子癇前期組高于輕度子癇前期組(FRAGE=624.55,FP-selecting=708.35,P<0.05),與組織化學(xué)分析結(jié)果一致。
　　 3、經(jīng)相關(guān)性分析顯示:子癇前期患者胎盤中RAGE蛋白的表達(dá)與P-selectin的蛋白的表達(dá)成正相關(guān)(r輕度=0.513,r重度=0.796,P<0.05)；且RAGE與P-selectinmRNA的表達(dá)成正相關(guān)(r輕度=0.607,r重度

12、=0.814,P<0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、RAGE蛋白及RAGE mRNA在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)高于正常孕婦組,提示其高表達(dá)在子癇前期的發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。
　　 2、P-selectin蛋白及P-selectin mRNA在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)高于正常孕婦組,提示其高表達(dá)與子癇前期的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。
　　 3、RAGE、P-selectin在子癇前期的患者胎盤組織