晚期糖基化終產(chǎn)物受體基因G82S多態(tài)性與冠心病相關(guān)性的研究.pdf

1、研究背景：晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)是體內(nèi)蛋白質(zhì)中賴氨酸部分、脂類或核酸與還原糖的羰基在無酶的條件下發(fā)生反應(yīng)，形成Schiff堿，經(jīng)Amadori反應(yīng)重排后形成相對穩(wěn)定的糖基化產(chǎn)物。AGEs主要通過與其細(xì)胞表面特異受體-RAGE(receptor for advanced glycation endproducts)的相互作用，導(dǎo)致氧化應(yīng)激、擴(kuò)大免疫/炎癥反應(yīng)、損傷內(nèi)皮細(xì)

2、胞功能、促進(jìn)膠原蛋白交聯(lián)、誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡等一系列病理反應(yīng)，對心血管系統(tǒng)產(chǎn)生損傷。我們早期研究發(fā)現(xiàn)AGEs可明顯增加心肌細(xì)胞的凋亡率，通過與RAGE增高胞內(nèi)游離鈣濃度，影響心肌細(xì)胞舒縮功能，而抗RAGE抗體可以阻斷其作用。有研究報(bào)道在糖尿病(DM)患者動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中RAGE高度表達(dá)。因此，RAGE被認(rèn)為是介導(dǎo)AGEs對心血管系統(tǒng)損傷的重要受體，可以作為研究血管疾病的侯選基因之一和藥物干預(yù)性研究的新靶點(diǎn)。RAGE基因位于人白細(xì)胞A位點(diǎn)

3、附近的染色體6p21.3。自1998年Hudson等檢測出一功能性氨基酸變異--位于RAGE基因外顯子Excon3密碼子82的甘氨酸突變成絲氨酸(Gly→Ser)，產(chǎn)生Alul限制性酶切位點(diǎn)(AG↓CT)，形成G82S多態(tài)現(xiàn)象以來，體外研究發(fā)現(xiàn)在中國侖鼠卵巢細(xì)胞(CHOs)和人類單核細(xì)胞中，S等位基因的配體結(jié)合親合力強(qiáng)于G等位基因，且配體激活產(chǎn)生的炎癥介質(zhì)增加，具有擴(kuò)大免疫/炎癥反應(yīng)的作用，提示RAGE基因G82S(G/S)多態(tài)性潛在性

4、地增強(qiáng)心血管疾病的發(fā)病、發(fā)展。 目的：以2004年7月～2005年12月廣州南方醫(yī)院心內(nèi)科住院病人(共700例)為研究對象，應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)的方法檢測上述入選對象RAGE基因G82S多態(tài)性基因型，試圖探討這一遺傳變異對我國高血壓(HP)、糖尿病(DM)和冠心病(CHD)人群疾病易感性的影響，以及通過比較我國與其他不同國家、不同種族之間 RAGE 基因G82S多態(tài)性的頻率分布來了解該基因多

5、態(tài)的分布特點(diǎn)，為進(jìn)一步闡明RAGE基因G82S多態(tài)性與復(fù)雜性狀疾病(如心血管疾病、糖尿病等)的關(guān)系提供強(qiáng)有力的流行病學(xué)依據(jù)。 方法：以2004年7月～2005年12月廣州南方醫(yī)院心內(nèi)科無血緣關(guān)系的住院病人(共700例)為研究對象，抽取其靜脈血并提取基因組DNA，應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)的方法檢測上述入選對象RAGE 基因G82S多態(tài)性基因型；1)首先將入選對象分為HP組(合并/不合并有CHD或D

6、M，355例)、DM組(合并/不合并有HP或CHD，170例)、CHD組(合并/不合并有HP或DM，330例)和對照組(CTRL組，170例)，比較各疾病組與CTRL組間 RAGE基因G82S(G/S)多態(tài)性的頻率分布有無差異來探討該多態(tài)變異與我國HP、DM和CHD疾病易感性的相關(guān)性；2)將上述入選對象分為不伴CHD的HP組(200例)、CHD&HP組(175例)、不伴HP的CHD組(155例)和CTRL組(170例)，比較各疾病組與C

7、TRL組間 G82S(G/S)多態(tài)性的頻率分布來進(jìn)一步探討該遺傳變異對我國HP、CHD&HP和CHD人群相關(guān)疾病易感性的影響；3)為探討合并/不合并DM對RAGE 基因G82S(G/S)多態(tài)性在我國HP、CHD＆HP以及CHD中的頻率分布有否影響，在上述分組的基礎(chǔ)上進(jìn)行亞組分析，分為單純HP組(126例)、HP&DM組(74例)、CHD&HP＆DM組(59例)、CHD&DM組(37例)、CHD&HP組(96例)、單純CHD組(138例)

8、和CTRL組(170例)，比較各組間 G82S(G/S)多態(tài)性的頻率分布來進(jìn)一步探討該基因多態(tài)性與我國HP、HP&DM、CHD＆HP&DM、CHD&DM、CHD&HP以及CHD之間的相關(guān)性；根據(jù)目前國內(nèi)外已進(jìn)行的RAGE基因G82S突變點(diǎn)的相關(guān)性研究，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，比較我國漢族人群、DM及CHD人群與不同國家、種族之間RAGE基因G82S多態(tài)性的頻率分布，進(jìn)一步了解該遺傳變異在中國漢族人中的分布特點(diǎn)，以及對疾病易感性的影響是否存在

9、地域和種族的差異。 結(jié)果： 一、RAGE基因G82S多態(tài)性對我國HP、DM以及CHD人群疾病易感性的影響CHD組患者G82S多態(tài)性SS基因型頻率分布顯著高于CTRL組(x<'2>=18.119，P<0.001，根據(jù)Bonferroni方法以α'=0.017為檢驗(yàn)水平，P<0.017)；其等位基因 S 頻率與CTRL組比較有顯著性差異(x<'2>=16.285，P=0.000，P<0.017)，OR值為2.081，95％C

10、I為(1.450，2.985)；HP組和DM組患者G82S基因型(GG、GS、SS)和等位基因(G、S)頻率與CTRL組比較均無顯著性差異(P>0.017)。分層x<'2>檢驗(yàn)提示G82S多態(tài)性突變型(GS&SS)與男性CHD患者的發(fā)病顯著相關(guān)。 二、RAGE基因G82S多態(tài)性對我國HP、CHD&HP以及CHD人群疾病易感性的影響CHD組與CHD&HP組患者G82S多態(tài)性SS基因型頻率分布顯著高于CTRL組(x<'2>值分別為1

11、9.637和9.126，P值分別為0.000和0.010，根據(jù)Bonferroni方法以α'=0.017為檢驗(yàn)水平，P<0.017)；其等位基因S頻率與CTRL組比較有顯著性差異(x<.2>值分別為17.757和8.546，P值分別為0.000和0.003，P<0.017)，OR值分別為2.303和1.842，95％CI為(1.553，3.416)和(1.219，2.785)；HP組G82S基因型(GG、GS、SS)和等位基因(G、S)

12、頻率與CTRL組比較無顯著性差異(P>0.017)。分層X。檢驗(yàn)提示G82S多態(tài)性突變型(GS&SS)與男性CHD患者、年齡≥60歲的CHD&HP患者的發(fā)病顯著相關(guān)；二分類Logistic回歸分析表明G82S(G/S)突變基因型GS&SS為CHD的發(fā)病的一項(xiàng)重要危險(xiǎn)因素，與CHD&HP的發(fā)病也存在一定相關(guān)性，但與HP的發(fā)病無關(guān)。 三、RAGE基因G82S多態(tài)性對我國HP、CHD和(或)合并2型DM人群疾病易感性的影響 四

13、、我國漢族人群、DM人群及CHD人群與不同國家、不同種族之間RAGE 基因G82S多態(tài)性頻率分布的比較 結(jié)論： 一、RAGE 基因G828(G/S)多態(tài)性是中國漢族人群冠心病的易感基因，與冠心病的發(fā)病存在明顯相關(guān)性，是冠心病的發(fā)病的一項(xiàng)重要危險(xiǎn)因素。 二、RAGE基因G82S(G/S)多態(tài)性在中國漢族人群男性冠心病的致病易感性更為顯著。 三、RAGE基因G82S(G/S)多態(tài)性并非中國漢族人群高血壓、2