西妥昔單抗與放化療聯(lián)用對(duì)喉鱗癌細(xì)胞的協(xié)同殺傷效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：西妥昔單抗（Cetuximab）是一種人鼠嵌合型IgG單克隆抗體，可與細(xì)胞表面的表皮生長因子受體(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)特異性結(jié)合，競爭性地阻斷表皮生長因子和其配體的結(jié)合，從而阻斷腫瘤細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲以及血管生成等生物學(xué)效應(yīng)。Cetuximab與部分化療藥物或放射線對(duì)不同種類的腫瘤細(xì)胞具有協(xié)同殺傷的效應(yīng)，降低不同種類腫瘤細(xì)胞對(duì)Cetuximab的抵抗性，提高對(duì)Cetuximab的

2、敏感性。本研究擬通過觀察西妥昔單抗聯(lián)合順鉑、放射線誘導(dǎo)人喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2的增殖、凋亡及細(xì)胞周期的影響，探討西妥昔單抗與順鉑、放射線聯(lián)合應(yīng)用對(duì)Hep-2細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及對(duì)其調(diào)控機(jī)制的初步探討。
　　方法：1、體外培養(yǎng)人喉鱗狀細(xì)胞癌Hep-2細(xì)胞株，取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)。
　　2、采用CCK-8試劑盒（cellcountingkit-8）分別檢測不同劑量的西妥昔單抗、順鉑、放射線對(duì)人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞的12h、24

3、h、48h、72h生長抑制率。
　　3、實(shí)驗(yàn)組分別給予西妥昔單抗1036μg/ml，順鉑3μg/ml，放射線4Gy，順鉑3μg/ml+放射線4Gy，西妥昔單抗1036μg/ml+順鉑3μg/ml，西妥昔單抗1036μg/ml+放射線4Gy，西妥昔單抗1036μg/ml+順鉑3μg/ml+放射線4Gy，同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組（不添加任何藥物），分別作用于人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞株24h，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞生長

4、抑制率，流式細(xì)胞儀檢測不同干預(yù)方案對(duì)Hep-2凋亡率及細(xì)胞周期分布情況。
　　結(jié)果：1、不同劑量的西妥昔單抗、順鉑、放射線對(duì)Hep-2細(xì)胞均有抑制作用，并在一定濃度范圍內(nèi)呈時(shí)間-劑量依賴性，24h半數(shù)抑制濃度（halfmaximalinhibitoryconcentration,IC50）分別為西妥昔單抗1036.84μg/L、順鉑3.08μg/ml、放射線4.18Gy；Hep-2細(xì)胞對(duì)西妥昔單抗的生長抑制作用較敏感。
　　

5、2、順鉑，放射線分別與西妥昔單抗聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)Hep-2細(xì)胞的生長抑制率顯著高于順鉑、放射線單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用（P<0.001），具有協(xié)同殺傷效應(yīng)。
　　3、經(jīng)西妥昔單抗與放射線、西妥昔單抗與順鉑聯(lián)合作用24h后處于早期凋亡階段的Hep-2細(xì)胞分別為（21.92±3.00）％、（18.44±2.57）%，顯著高于陰性對(duì)照組與放射線、順鉑的單獨(dú)或聯(lián)合作用組（P<0.001），提示西妥昔單抗對(duì)順鉑或放射線在體外誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細(xì)胞株的凋

6、亡具有顯著的協(xié)同作用。
　　4、單藥西妥昔單抗組中S期細(xì)胞所占比例較陰性對(duì)照組比例顯著增高（P<0.001）；西妥昔單抗+放射線組（P=0.005），西妥昔單抗+順鉑+放射線組（P=0.002）中，G0/G1期細(xì)胞所占比例明顯高于單純放射線組。
　　結(jié)論：1、人喉鱗癌Hep-2細(xì)胞株對(duì)西妥昔單抗誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡敏感，在一定濃度范圍內(nèi)呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　2、順鉑和/或放射線與西妥昔單抗聯(lián)用能顯著提高對(duì)Hep-2細(xì)胞的

7、生長抑制作用，對(duì)Hep-2細(xì)胞的增殖具有協(xié)同抑制效應(yīng)。
　　3、西妥昔單抗與順鉑或放射線聯(lián)用能顯著提高Hep-2的凋亡率，提示西妥昔單抗對(duì)順鉑或放射線在體外誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細(xì)胞株的凋亡具有顯著的協(xié)同作用。
　　4、西妥昔單抗可以通過將Hep-2細(xì)胞阻滯在細(xì)胞分裂的S期達(dá)到抑制細(xì)胞分裂阻止其增殖失控的作用。西妥昔單抗與放射線聯(lián)用亦可使人喉癌Hep-2細(xì)胞株阻滯在對(duì)放射線敏感的G0/G1期，體外可顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而對(duì)放射