c-Met抑制劑PHA665752聯(lián)合貝伐單抗或西妥昔單抗對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的影響.pdf

1、背景:結(jié)直腸癌是常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著人類的健康。在美國，結(jié)直腸癌已成為發(fā)病率和死亡率第三的惡性腫瘤，在我國也呈逐年上升的趨勢。由于發(fā)病早期癥狀不明顯及早期普查等措施欠缺，大部分病人在就診時(shí)已進(jìn)展至中晚期。目前，結(jié)直腸癌的治療是以手術(shù)切除為主的綜合性治療。大多數(shù)結(jié)直腸癌患者需要輔以化療，但是由于耐藥、毒副作用等問題限制了其廣泛持續(xù)使用。近些年，靶向藥物在結(jié)直腸癌患者治療中取得了令人鼓舞的療效。
　　因此，尋求新的治療靶點(diǎn)或

2、傳統(tǒng)治療的增敏手段很有必要。研究發(fā)現(xiàn)，HGF/c-Met信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移過程中起到很重要的作用，HGF在體外實(shí)驗(yàn)中可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長和運(yùn)動，HGF存在的情況下，c-Met能夠?qū)⑸掀ぜ?xì)胞向有侵襲力的間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。臨床研究還發(fā)現(xiàn)，c-Met在結(jié)腸腺瘤、結(jié)直腸癌以及其轉(zhuǎn)移癌的組織中呈過表達(dá)，而在正常的腸組織中呈低表達(dá)，這也表明c-Met的表達(dá)可促進(jìn)結(jié)直腸癌的發(fā)展。與正常人比較，結(jié)直腸癌患者的血清中HGF含量顯著升高，而且分期越晚

3、，HGF含量越高，合并肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者較無轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌患者，HGF含量更高。使用c-Met抑制劑可逆轉(zhuǎn)腫瘤對VEGF為靶點(diǎn)和以EGFR為靶點(diǎn)藥物的抵抗，聯(lián)合用藥能夠更好地抑制腫瘤。但是，基于c-Met的分子靶向治療聯(lián)合傳統(tǒng)放化療或其他靶向治療在結(jié)直腸癌治療中的研究報(bào)道罕見。
　　目的:探討c-Met抑制劑PHA-665752聯(lián)合分子靶向藥物貝伐單抗或西妥昔單抗對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的影響。
　　方法:
　

4、　1采用焦磷酸測序技術(shù)(Pyrosequencing)檢測結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116的KRAS基因狀態(tài)。
　　2 MTT法:
　　(1)采用MTT法檢測不同濃度、不同作用時(shí)間的PHA-665752、Bevacizumab、Cetuximab對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116細(xì)胞增殖的影響。選出聯(lián)合用藥中單藥的最適藥物濃度及作用時(shí)間。
　　(2)采用MTT法檢測PHA-665752聯(lián)合Bevacizumab對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-11

5、6細(xì)胞增殖的影響。
　　(3)采用MTT法檢測PHA-665752聯(lián)合Cetuximab對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116細(xì)胞增殖的影響。
　　3采用流式細(xì)胞術(shù)檢測PHA-665752聯(lián)合Cetuximab對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116細(xì)胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　1焦磷酸測序技術(shù)(Pyrosequencing)檢測:結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116的KRAS基因狀態(tài)為13密碼子突變。
　　2 MTT法:
　　

6、(1)PHA-665752單藥處理，藥物濃度越大，對細(xì)胞增殖的抑制越明顯（P＜0.01）。Bevacizumab單藥處理，即使增大藥物濃度至320μg/ml，對細(xì)胞增殖仍無抑制（P＞0.05）。Cetuximab單藥處理，即使增大藥物濃度至80μg/ml，對細(xì)胞增殖仍無抑制（P＞0.05）。
　　(2)PHA-665752聯(lián)合Bevacizumab組對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的抑制強(qiáng)于對照組及Bevacizumab單藥組(P＜

7、0.01)，但與PHA-665752單藥組比較無差異(P＞0.05)。
　　(3)PHA-665752聯(lián)合Cetuximab組對結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116增殖的抑制強(qiáng)于對照組、Cetuximab單藥組和PHA-665752單藥組（P＜0.01）。
　　3流式細(xì)胞術(shù):
　　(1)細(xì)胞周期:對照組細(xì)胞的G0/G1期百分比為（47.33±0.45）％;Cetuximab單藥組細(xì)胞的G0/G1期百分比為(43.83±0.35)％

8、，少于對照組（P＜0.01); PHA-665752單藥組細(xì)胞的G0/G1期百分比為(71.90±0.26)％，多于對照組（P＜0.01）;PHA-665752聯(lián)合Cetuximab組細(xì)胞的G0/G1期百分比為(60.00±0.70)％，多于對照組和Cetuximab單藥組(P＜0.01)，但少于PHA-665752單藥組(P＜0.01)。
　　(2)細(xì)胞凋亡:對照組細(xì)胞凋亡率為（6.04±0.06）％，Cetuximab單藥組細(xì)

9、胞凋亡率為(5.99±0.13)％，兩組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05); PHA-665752單藥組細(xì)胞凋亡率為(10.35±0.02)％，多于對照組(P＜0.01); PHA-665752聯(lián)合Cetuximab組細(xì)胞凋亡率(13.55±0.08)％，均多于對照組、Cetuximab單藥組和PHA-665752單藥組（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116的KRAS基因狀態(tài)為13密碼子突變。
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