HMGB-1-TLR4在急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的
　　 1、建立急性T4段脊髓撞擊傷繼發(fā)肺損傷大鼠模型，并動(dòng)態(tài)觀察血?dú)夥治鲋笜?biāo)、肺損傷病理評(píng)分、肺血管通透性指數(shù)、肺濕干重比及炎癥因子表達(dá)的變化，評(píng)估急性脊髓損傷后大鼠肺損傷發(fā)生發(fā)展的規(guī)律。
　　 2、檢測(cè)大鼠急性脊髓損傷后腦脊液、血清、肺組織中HMGB-1水平及肺組織TLR4表達(dá)，并評(píng)估其變化規(guī)律。
　　 3、使用HMGB-1單克隆抗體對(duì)急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷大鼠模型進(jìn)行干預(yù)，通過評(píng)價(jià)其保護(hù)作用，驗(yàn)證H

2、MGB-1在急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷中的作用。
　　 研究方法
　　 1、130只成年Wistar大鼠，隨機(jī)分為三組:實(shí)驗(yàn)組(ASCI組)60只，T4段脊髓改良Allen's打擊法以10g×5cm打擊力度致急性脊髓撞擊傷;假手術(shù)組(Sham組)60只，只暴露脊髓，不進(jìn)行脊髓打擊;空白對(duì)照組（Control組）10只:不做任何處理。實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組標(biāo)本獲取時(shí)間為造模后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、1周?？瞻?/p>

3、對(duì)照組直接獲取標(biāo)本。檢測(cè)指標(biāo)包括動(dòng)脈血?dú)夥治?、胸膜下出血程度、肺損傷病理評(píng)分、肺濕干重比、肺通透指數(shù)、血清及肺泡灌洗液IL-6和TNF-α。分析指標(biāo)變化規(guī)律。
　　 2、55只成年Wistar大鼠，隨機(jī)分為三組:實(shí)驗(yàn)組(ASCI組)25只，T4段脊髓改良Allen's打擊法以10g×5cm打擊力度致急性脊髓撞擊傷;假手術(shù)組(Sham組)25只，只暴露脊髓，不進(jìn)行脊髓打擊;空白對(duì)照組（Control組）5只:不做任何處理。實(shí)驗(yàn)組和

4、假手術(shù)組標(biāo)本獲取時(shí)間為造模后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)。雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定腦脊液、血清HMGB-1含量，Western blot法檢測(cè)肺組織HMGB-1含量，qPCR檢測(cè)肺組織TLR4 mRNA表達(dá)。
　　 3、成年wistar大鼠60只，260-280g，不限雌雄。隨機(jī)分為:脊髓損傷組(ASCI組)20只，抗體干預(yù)組(Ab組)20只:脊髓損傷后即刻自尾靜脈注射抗HMGB-1單克隆抗體，生理鹽

5、水組20只，脊髓損傷后自尾靜脈注射生理鹽水。各組標(biāo)本獲取時(shí)間為造模后6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、72小時(shí)共4個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)。ABC-ELISA法測(cè)定血清HMGB-1含量，Western blot法檢測(cè)肺組織HMGB-1含量。同時(shí)檢測(cè)動(dòng)脈血?dú)夥治?、肺損傷病理評(píng)分、肺濕干重比、血清及肺泡灌洗液IL-6和TNF-α等指標(biāo)。
　　 結(jié)果
　　 1、大鼠急性胸段脊髓損傷后動(dòng)脈血pH值逐漸降低、PaO2降低、PaCO2升高(P＜0.05

6、)。損傷后72h動(dòng)脈血pH值和PaO2達(dá)最低值，PaCO2達(dá)最高值大鼠脊髓損傷后12h起，肺通透指數(shù)逐漸增高(P＜0.05)，并在損傷后72h達(dá)到峰值。肺胸膜下出血程度和肺損傷評(píng)分均升高(P＜0.05)，在損傷后72h達(dá)到峰值。損傷后6h起右肺下葉和副葉濕干重比明顯增高，12h起各葉濕干重比均明顯增高。血清及肺泡灌洗液炎癥因子損傷后明顯升高(P＜0.05)，其中血清TNF-α、IL-6分別在損傷后12h達(dá)到峰值，肺泡灌洗液TNF-α和I

7、L-6分別在損傷后24h達(dá)到高峰。
　　 2.大鼠急性脊髓損傷后腦脊液HMGB-1明顯上升(P＜0.05)，在損傷后12h達(dá)到第一次高峰，繼而稍下降，在損傷后72小時(shí)達(dá)到第二次高峰;血清HMGB-1明顯上升，在損傷后12h達(dá)到高峰(P＜0.05);肺組織HMGB-1表達(dá)持續(xù)上升，在損傷后72h達(dá)到高峰。肺組織TLR4 mRNA表達(dá)損傷后12h、24h、72h與假手術(shù)組相比，明顯升高(P＜0.05)。
　　 3.抗體干預(yù)組

8、大鼠在損傷后6-24h血清HMGB-1水平較損傷組明顯降低(P＜0.05);肺組織勻漿HMGB-1表達(dá)在損傷后6-72h明顯低于損傷組(P＜0.05);12h、24h、72h動(dòng)脈血PaO2明顯高于脊髓損傷組(P＜0.05);72h時(shí)動(dòng)脈血PaCO2明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);各時(shí)間點(diǎn)肺濕干重比均低于相同時(shí)間點(diǎn)脊髓損傷組大鼠(P＜0.05);24h時(shí)肺組織病理學(xué)評(píng)分低于脊髓損傷(P＜0.05)。6h、12h、24h血清和肺泡灌洗液

9、TNF-α水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);6h、12h血清IL-6水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);損傷后6h、12h、24h肺泡灌洗液IL-6水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.大鼠急性胸4段脊髓損傷后可出現(xiàn)明顯的肺組織充血、出血、水腫和呼吸功能的減退。肺損傷程度在脊髓損傷后3天達(dá)到峰值。
　　 2.急性脊髓損傷后血液和肺中異常聚集的HMGB-1可能通過TLR4信號(hào)途徑