HMGB-1-TLR4在急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷中作用的實驗研究.pdf

1、研究目的
　　 1、建立急性T4段脊髓撞擊傷繼發(fā)肺損傷大鼠模型，并動態(tài)觀察血氣分析指標、肺損傷病理評分、肺血管通透性指數、肺濕干重比及炎癥因子表達的變化，評估急性脊髓損傷后大鼠肺損傷發(fā)生發(fā)展的規(guī)律。
　　 2、檢測大鼠急性脊髓損傷后腦脊液、血清、肺組織中HMGB-1水平及肺組織TLR4表達，并評估其變化規(guī)律。
　　 3、使用HMGB-1單克隆抗體對急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷大鼠模型進行干預，通過評價其保護作用，驗證H

2、MGB-1在急性脊髓損傷繼發(fā)肺損傷中的作用。
　　 研究方法
　　 1、130只成年Wistar大鼠，隨機分為三組:實驗組(ASCI組)60只，T4段脊髓改良Allen's打擊法以10g×5cm打擊力度致急性脊髓撞擊傷;假手術組(Sham組)60只，只暴露脊髓，不進行脊髓打擊;空白對照組（Control組）10只:不做任何處理。實驗組和假手術組標本獲取時間為造模后6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、1周?？瞻?/p>

3、對照組直接獲取標本。檢測指標包括動脈血氣分析、胸膜下出血程度、肺損傷病理評分、肺濕干重比、肺通透指數、血清及肺泡灌洗液IL-6和TNF-α。分析指標變化規(guī)律。
　　 2、55只成年Wistar大鼠，隨機分為三組:實驗組(ASCI組)25只，T4段脊髓改良Allen's打擊法以10g×5cm打擊力度致急性脊髓撞擊傷;假手術組(Sham組)25只，只暴露脊髓，不進行脊髓打擊;空白對照組（Control組）5只:不做任何處理。實驗組和

4、假手術組標本獲取時間為造模后6小時、12小時、24小時、48小時、72小時。雙抗體夾心ABC-ELISA法測定腦脊液、血清HMGB-1含量，Western blot法檢測肺組織HMGB-1含量，qPCR檢測肺組織TLR4 mRNA表達。
　　 3、成年wistar大鼠60只，260-280g，不限雌雄。隨機分為:脊髓損傷組(ASCI組)20只，抗體干預組(Ab組)20只:脊髓損傷后即刻自尾靜脈注射抗HMGB-1單克隆抗體，生理鹽

5、水組20只，脊髓損傷后自尾靜脈注射生理鹽水。各組標本獲取時間為造模后6小時、12小時、24小時、72小時共4個時間節(jié)點。ABC-ELISA法測定血清HMGB-1含量，Western blot法檢測肺組織HMGB-1含量。同時檢測動脈血氣分析、肺損傷病理評分、肺濕干重比、血清及肺泡灌洗液IL-6和TNF-α等指標。
　　 結果
　　 1、大鼠急性胸段脊髓損傷后動脈血pH值逐漸降低、PaO2降低、PaCO2升高(P＜0.05

6、)。損傷后72h動脈血pH值和PaO2達最低值，PaCO2達最高值大鼠脊髓損傷后12h起，肺通透指數逐漸增高(P＜0.05)，并在損傷后72h達到峰值。肺胸膜下出血程度和肺損傷評分均升高(P＜0.05)，在損傷后72h達到峰值。損傷后6h起右肺下葉和副葉濕干重比明顯增高，12h起各葉濕干重比均明顯增高。血清及肺泡灌洗液炎癥因子損傷后明顯升高(P＜0.05)，其中血清TNF-α、IL-6分別在損傷后12h達到峰值，肺泡灌洗液TNF-α和I

7、L-6分別在損傷后24h達到高峰。
　　 2.大鼠急性脊髓損傷后腦脊液HMGB-1明顯上升(P＜0.05)，在損傷后12h達到第一次高峰，繼而稍下降，在損傷后72小時達到第二次高峰;血清HMGB-1明顯上升，在損傷后12h達到高峰(P＜0.05);肺組織HMGB-1表達持續(xù)上升，在損傷后72h達到高峰。肺組織TLR4 mRNA表達損傷后12h、24h、72h與假手術組相比，明顯升高(P＜0.05)。
　　 3.抗體干預組

8、大鼠在損傷后6-24h血清HMGB-1水平較損傷組明顯降低(P＜0.05);肺組織勻漿HMGB-1表達在損傷后6-72h明顯低于損傷組(P＜0.05);12h、24h、72h動脈血PaO2明顯高于脊髓損傷組(P＜0.05);72h時動脈血PaCO2明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);各時間點肺濕干重比均低于相同時間點脊髓損傷組大鼠(P＜0.05);24h時肺組織病理學評分低于脊髓損傷(P＜0.05)。6h、12h、24h血清和肺泡灌洗液

9、TNF-α水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);6h、12h血清IL-6水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05);損傷后6h、12h、24h肺泡灌洗液IL-6水平明顯低于脊髓損傷組(P＜0.05)。
　　 結論
　　 1.大鼠急性胸4段脊髓損傷后可出現明顯的肺組織充血、出血、水腫和呼吸功能的減退。肺損傷程度在脊髓損傷后3天達到峰值。
　　 2.急性脊髓損傷后血液和肺中異常聚集的HMGB-1可能通過TLR4信號途徑