HSP70與TLR4-NFκB信號(hào)途徑在急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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1、目的:本實(shí)驗(yàn)采用Wistar大鼠尾靜脈注射脂多糖(LPS)制備急性肺損傷模型(ALI),通過檢測(cè)熱休克蛋白70(HSP70)、Toll樣受體4(Toll-like receptor4,TLR4)、核轉(zhuǎn)錄因子 kappa B(NF-κB)及相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)水平,探討 HSP70與TLR4/NF-κB信號(hào)途徑在急性肺損傷發(fā)病機(jī)制中的作用及相互調(diào)控關(guān)系。
  方法:選用48只清潔級(jí)Wistar大鼠,隨機(jī)分為兩組:生理鹽水對(duì)照組(N

2、S組,24只)、急性肺損傷模型組(LPS組,24只),每組再細(xì)分為2、6、24小時(shí)三個(gè)亞組(每組各8只)。通過尾靜脈一次注射LPS(6mg/kg﹒body weight)制備急性肺損傷模型,測(cè)定各組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)脈血?dú)夥治?。?dòng)物麻醉后處死,取部分肺組織固定,采用蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)觀測(cè)肺組織病理結(jié)構(gòu)的微觀變化情況。另取部分肺組織稱重后干燥來檢測(cè)濕/干重(W/D)比。此外,

3、利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)方法檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的表達(dá)變化,實(shí)時(shí)定量PCR(Real Time-PCR)法測(cè)定肺組織HSP70、TLR4及NF-κB mRNA水平的變化。
  結(jié)果:動(dòng)脈血?dú)夥治鼋Y(jié)果顯示,LPS組大鼠相比 NS對(duì)照組,均表現(xiàn)為持續(xù)性低氧血癥,PaO2隨著LPS給予的時(shí)間增長(zhǎng)而顯著下降,肺組織W/D比值隨著給予LPS時(shí)間點(diǎn)的延長(zhǎng)而明顯增高

4、,上述變化與NS對(duì)照組比較,各時(shí)間點(diǎn)均具有顯著性差異(P<0.05)。利用光學(xué)顯微鏡鏡觀測(cè)HE染色結(jié)果,可見肺組織間隔增寬,出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及紅細(xì)胞外滲現(xiàn)象,肺泡腔明顯變窄,肺間質(zhì)滲出水腫、部分可見滲出損傷表現(xiàn)。利用半定量評(píng)分分析肺組織病理損傷,發(fā)現(xiàn)隨著給予LPS時(shí)間點(diǎn)的延長(zhǎng),病理損傷加重,評(píng)分值數(shù)增高。LPS組大鼠血清中TNF-α、IL-6、 IL-10的表達(dá)較NS組明顯升高,同時(shí),HSP70在肺組織中的表達(dá)水平隨時(shí)間點(diǎn)推進(jìn)逐漸升高,

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